為了制備產(chǎn)氣莢膜梭菌致病性毒力因子α毒素的單克隆抗體,試驗采用PCR法獲得α毒素基因,克隆入原核表達質(zhì)粒p ET-30b,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21感受態(tài)細胞,構(gòu)建表達α毒素的重組菌BL21/p ET-30b-α;IPTG誘導(dǎo)重組菌表達,并進行SDS-PAGE分析,以純化的重組α毒素蛋白為免疫原免疫Balb/c小鼠,經(jīng)篩選、亞類鑒定及特異性試驗檢測單克隆抗體。結(jié)果表明:重組菌表達的α毒素蛋白分子質(zhì)量約為43 ku;雜交瘤細胞株3C5能夠穩(wěn)定分泌抗α毒素單克隆抗體,單克隆抗體亞型為Ig G2a型,能夠特異識別產(chǎn)氣莢膜梭菌天然α毒素蛋白。說明制備的單克隆抗體具有良好的反應(yīng)原性。 

【文章來源】：黑龍江畜牧獸醫(yī). 2017,(03)北大核心

【文章頁數(shù)】：3 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 菌株、細胞和質(zhì)粒
    1.2 主要試劑
    1.3 重組菌BL21/p ET-30b-α的構(gòu)建
    1.4 α毒素蛋白的誘導(dǎo)表達
    1.5 α毒素蛋白的純化與復(fù)性
    1.6 單克隆抗體的制備
    1.7 單克隆抗體識別天然蛋白的特異性檢測
    1.8 單克隆抗體亞型與效價的測定
2 結(jié)果與分析
    2.1 重組菌BL21/p ET-30b-α的構(gòu)建
    2.2 α毒素蛋白的誘導(dǎo)表達
    2.3 雜交瘤細胞的建立
    2.4 單克隆抗體識別天然蛋白的特異性檢測
    2.5 抗體效價的測定
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素在干酪乳桿菌中的誘導(dǎo)表達及其小鼠口服免疫力[J]. 李曉靜,夏春麗,李一經(jīng).  微生物學(xué)報. 2009(08)
[2]幽門螺桿菌vacA基因重組表達的包涵體復(fù)性及ELISA方法的建立[J]. 黨雙鎖,王宏倉,賈曉黎,袁利超,王寶峰,張欣,張正國,程延安.  世界華人消化雜志. 2005(20)
[3]抗A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素單鏈抗體基因的克隆和表達[J]. 趙寶華,許崇波.  生物工程學(xué)報. 2001(05)



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