旨在建立藍舌病病毒（BTV）血清學ELISA抗體檢測方法,本研究以原核表達并純化的BTV NS4重組蛋白為包被抗原,通過反應條件優(yōu)化,建立了一種BTV重組NS4蛋白的間接ELISA抗體檢測方法。SDS-PAGE結(jié)果顯示,獲得大小約52 ku的NS4重組融合蛋白,主要在上清中存在,Western blot顯示,純化后的重組蛋白具有良好的抗原性。通過方陣試驗進行了ELISA反應條件優(yōu)化,確定了重組蛋白抗原最佳包被量為3.0μg·孔^-1;血清最佳稀釋倍數(shù)為1∶200,酶標二抗最佳工作濃度為1∶4 000,臨界值分別為0.29和0.35。上述以NS4蛋白作為包被抗原建立的BTV抗體間接ELISA方法檢測敏感性可達1∶1 600;批內(nèi)和批間重復性變異系數(shù)均小于10%;檢測76份重慶地區(qū)牛群血清樣品,陽性符合率為98%,陰性符合率為100%。本研究建立的間接ELISA方法為臨床BTV血清抗體檢測及BTV血清流行病學調(diào)查奠定了基礎。 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學報. 2020,51(12)北大核心CSCD

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重組質(zhì)粒酶切鑒定（A）及重組融合蛋白SDS-PAGE分析（B)

圖1 重組質(zhì)粒酶切鑒定（A）及重組融合蛋白SDS-PAGE分析（B)表1 方陣法確定NS4蛋白包被量與血清稀釋度(OD450 nm)Table 1 Determination of NS4 protein coating and serum dilution by square matrix method(OD450 nm) 抗原量/(μg·mL-1)Amount of antigen 陽性血清Positive serum 陰性血清Negative serum 空白對照Blank control 1∶50 1∶100 1∶200 1∶400 1∶50 1∶100 1∶200 1∶400 6.000 0 1.252 3 1.023 5 0.924 5 0.695 4 0.120 9 0.084 1 0.061 2 0.040 9 0.034 2 3.000 0 1.180 8 0.985 2 0.852 9 0.512 9 0.075 7 0.061 4 0.042 9 0.031 9 0.031 9 1.500 0 1.040 8 0.897 6 0.752 6 0.485 6 0.069 8 0.075 4 0.042 8 0.031 4 0.041 8 0.750 0 0.826 4 0.685 6 0.591 7 0.258 9 0.058 7 0.054 7 0.049 2 0.030 6 0.031 4 0.375 0 0.562 4 0.421 6 0.280 1 0.165 9 0.051 6 0.048 7 0.047 6 0.032 8 0.021 0 0.187 5 0.354 8 0.285 6 0.156 3 0.103 9 0.042 1 0.040 3 0.041 3 0.031 0 0.021 3

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Ⅰ型藍舌病毒NS4基因的克隆及序列分析[J]. 趙瑤,徐棟,馬三立,馬鮮平,王芝英,張德志,李前勇,謝成華,楊發(fā)輝,易華山.  西南大學學報(自然科學版). 2020(09)
[2]藍舌病毒結(jié)構(gòu)與組裝機制研究進展[J]. 易華山,趙瑤,馬鮮平,王芝英,張德志,李前勇,左福元.  家畜生態(tài)學報. 2020(07)
[3]病毒性疾病對奶牛繁殖力的重要影響[J]. D.Claire Wathes,Chike F.Oguejiofor,Carole Thomas,Zhangrui Cheng.  Engineering. 2020(01)
[4]藍舌病病毒4型特異性競爭ELISA檢測方法的建立[J]. 李佳璇,臧明鑫,謝雙羽,姜艷平,崔文,徐義剛,劉敏,喬薪瑗,王麗,周晗,李一經(jīng),唐麗杰.  生物工程學報. 2017(08)
[5]藍舌病病毒7型毒株的分離與分子鑒定[J]. 呂敏娜,楊恒,孫銘飛,李娟,林栩慧,張健騑,廖申權(quán),戚南山,吳彩艷,李華春,陳琴苓.  畜牧獸醫(yī)學報. 2017(07)
[6]藍舌病病毒抗原捕獲ELISA檢測方法的建立[J]. 苗海生,李樂,廖德芳,朱建波,寇美齡,楊永欽,孫強,李華春.  中國預防獸醫(yī)學報. 2015(03)
[7]藍舌病病毒阻斷ELISA抗體檢測方法的建立[J]. 苗海生,李樂,朱建波,肖雷,廖德芳,王金萍,李華春.  中國預防獸醫(yī)學報. 2014(02)
[8]以合成肽為抗原建立口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測ELISA試劑盒[J]. 楊繼飛,楊蘇珍,楊艷艷,職愛民,趙東,郅玉寶,邢廣旭,鄧瑞廣,柴書軍,張改平.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2010(06)
[9]應用套入式聚合酶鏈反應（Nested-PCR）檢測藍舌病病毒的研究[J]. 馬洪超,孫淑芳,陶茂輝,尹燕博,郭福生,龔振華,蔡麗娟,蔣正軍,丁有勝,黃運生,陳書琨.  畜牧獸醫(yī)學報. 2000(02)



本文編號：3453403