質(zhì)粒介導的多黏菌素抗性基因mcr-1在多藥耐藥腸桿菌科細菌中的發(fā)現(xiàn),迅速引起全球各個國家政府和科學家的高度關(guān)注,這導致多黏菌素作為治療嚴重耐藥革蘭氏陰性腸桿菌感染的“最后防線”作用極大降低。因此,臨床上急需解決攜帶mcr-1基因的多藥耐藥菌感染問題。本研究旨在通過實驗室建立的MCR-1耐藥酶抑制劑篩選平臺篩選出一種MCR-1活性抑制劑以恢復多黏菌素對多藥耐藥腸桿菌科細菌的抗菌活性,并成功篩選獲得天然化合物和厚樸酚,其作為MCR-1的活性抑制劑可顯著恢復多黏菌素類抗生素的體內(nèi)外抗菌活性。通過棋盤法MIC試驗發(fā)現(xiàn)和厚樸酚濃度在16μg/mL時可顯著恢復多黏菌素對MCR-1陽性大腸桿菌、沙門氏菌以及肺炎克雷伯的抑菌作用,當和厚樸酚的濃度≥16μg/mL時,其最小抑菌濃度試驗的分級抑菌濃度指數(shù)FICI均小于0.5（0.09±0.00至0.27±0.06）。此外,和厚樸酚與多黏菌素在MCR-1陰性耐多黏菌素革蘭氏陰性腸桿菌科菌株中也具有顯著的協(xié)同作用。通過生長曲線試驗驗證了和厚樸酚在使用濃度條件下對MCR-1陽性腸桿菌菌株的生長無顯著影響。通過細胞毒性試驗發(fā)現(xiàn),和厚樸酚濃度低于32μg/mL時,... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮寫詞注釋表
引言
第一篇 文獻綜述
    第1章 多黏菌素研究現(xiàn)狀
        1.1 多黏菌素的臨床使用狀況
        1.2 多黏菌素的抗菌機制
            1.2.1 核糖體結(jié)合
            1.2.2 細胞呼吸
            1.2.3 細胞分裂
            1.2.4 Ex Portal結(jié)構(gòu)
        1.3 多黏菌素的耐藥機制
            1.3.1 LPS的類脂A修飾
            1.3.2 壓力反應
            1.3.3 多黏菌素外排泵
            1.3.4 質(zhì)粒介導的抗性
    第2章 MCR-1 介導的多黏菌素耐藥性
        2.1 MCR-1 的發(fā)現(xiàn)及傳播情況
        2.2 MCR-1 介導的多黏菌素耐藥機制
        2.3 MCR-1 產(chǎn)生的危害
    第3章 和厚樸酚研究現(xiàn)狀
        3.1 和厚樸酚的藥理學作用研究現(xiàn)狀
            3.1.1 抗腫瘤作用
            3.1.2 抗氧化作用
            3.1.3 免疫效應
            3.1.4 抗病毒活性
            3.1.5 和厚樸酚對心臟和肝細胞的保護作用
            3.1.6 神經(jīng)生物學效應
            3.1.7 抗菌活性
        3.2 和厚樸酚的毒理學研究現(xiàn)狀
        3.3 厚樸中和厚樸酚的提取純化工藝研究現(xiàn)狀
第二篇 研究內(nèi)容
    第1章 和厚樸酚抗MCR-1 活性的發(fā)現(xiàn)
        1.1 試驗材料
            1.1.1 試驗菌株和試劑
            1.1.2 設(shè)備儀器
        1.2 試驗方法
            1.2.1 MCR-1 載體構(gòu)建
            1.2.2 肉湯微量稀釋棋盤法
            1.2.3 生長曲線
            1.2.4 時間-殺菌曲線
            1.2.5 瓊脂擴散試驗
            1.2.6 細胞毒性試驗
            1.2.7 統(tǒng)計學分析
        1.3 試驗結(jié)果
            1.3.1 和厚樸酚可有效恢復多黏菌素的抗菌活性
            1.3.2 和厚樸酚對產(chǎn)MCR-1 耐藥菌抗菌活性較低
            1.3.3 和厚樸酚聯(lián)用多黏菌素對產(chǎn)MCR-1 耐藥菌呈現(xiàn)明顯的殺菌作用
            1.3.4 和厚樸酚對宿主細胞無細胞毒性作用
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第2章 和厚樸酚抑制MCR-1 活性的作用機制
        2.1 試驗材料
            2.1.1 試驗試劑
            2.1.2 設(shè)備儀器
        2.2 試驗方法
            2.2.1 蛋白免疫印跡試驗
            2.2.2 分子動力學模擬
            2.2.3 MCR-1 氨基酸定點突變
            2.2.4 FICI測定
        2.3 試驗結(jié)果
            2.3.1 和厚樸酚不影響MCR-1 的表達
            2.3.2 和厚樸酚抑制MCR-1 活性機制分析
            2.3.3 和厚樸酚對MCR-1 抑制作用機制的確證
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第3章 和厚樸酚聯(lián)用多黏菌素對產(chǎn)MCR-1耐藥菌感染小鼠模型的實驗治療學研究
        3.1 試驗材料
            3.1.1 試驗動物和試劑
            3.1.2 設(shè)備儀器
        3.2 試驗方法
            3.2.1 小鼠全身感染模型建立及其實驗治療學研究
            3.2.2 小鼠肌肉感染模型建立及其實驗治療學研究
            3.2.3 小鼠肺炎模型建立及其實驗治療學研究
            3.2.4 統(tǒng)計學分析
        3.3 試驗結(jié)果
            3.3.1 和厚樸酚聯(lián)用多粘菌素有效降低大腸桿菌小鼠全身感染的死亡率
            3.3.2 和厚樸酚聯(lián)用多粘菌素有效降低感染小鼠肌肉菌落定植
            3.3.3 和厚樸酚聯(lián)用多粘菌素有效緩解小鼠肺炎的病理性損傷作用
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第4章 厚樸中和厚樸酚提取工藝研究
        4.1 試驗材料
            4.1.1 試驗試劑
            4.1.2 設(shè)備儀器
        4.2 試驗方法
            4.2.1 提取溶媒篩選
            4.2.2 溶解度考察
            4.2.3 提取工藝研究
            4.2.4 減壓濃縮溫度考察
            4.2.5 樣品制備
        4.3 試驗結(jié)果
            4.3.1 溶解度考察
            4.3.2 提取工藝研究
            4.3.3 減壓濃縮溫度考察
            4.3.4 濃縮液的制備及轉(zhuǎn)移率測定
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第5章 含量方法學驗證及初步藥效學考察
        5.1 試驗材料
            5.1.1 試驗試劑
            5.1.2 設(shè)備儀器
        5.2 試驗方法
            5.2.1 含量測定方法
            5.2.2 含量測定方法學驗證
            5.2.3 厚樸提取物恢復多黏菌素抗菌活性分析
        5.3 試驗結(jié)果
            5.3.1 供試品溶液穩(wěn)定性考察
            5.3.2 系統(tǒng)適應性試驗
            5.3.3 專屬性考察
            5.3.4 精密度
            5.3.5 線性與范圍
            5.3.6 回收率
            5.3.7 厚樸提取物有效恢復多黏菌素對產(chǎn)MCR-1 耐藥菌的抗菌活性
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
導師簡介
作者簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]厚樸酚與和厚樸酚溶解度的測定及其分離[J]. 蘇德輝,周敏,唐新宗,崔春雨,劉盛,韋萬興.  廣西大學學報(自然科學版). 2012(06)
[2]Honokiol induces apoptosis through p53-independent pathway in human colorectal cell line RKO[J]. Tao Wang Fei Chen Zhe Chen Yi-Feng Wu Xiao-Li Xu Shu Zheng Xun Hu Cancer Institute,Second Hospital of Medicine College of Zhejiang University,Hangzhou 310009,Zhejiang Province,ChinaWu,Life Science College of Zhejiang University,Hangzhou 310009,Zhejiang Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2004(15)



本文編號：3449587