為建立一種同時(shí)檢測(cè)豬輪狀病毒（PRoV）、豬札幌病毒（PoSaV）和豬星狀病毒（PAstV）的三重PCR方法,本研究參考PRoV的VP6基因、PoSaV的RdRp基因以及PAstV的ORF1基因序列分別設(shè)計(jì)特異性引物,通過特異性、敏感性、重復(fù)性試驗(yàn)優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了快速鑒別PRoV、PoSaV和PAstV的三重PCR方法。試驗(yàn)表明,該方法能特異性擴(kuò)增PRoV、PoSaV、PAstV的目的片段,對(duì)豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、偽狂犬病病毒（PRV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）等常見豬病病毒的檢測(cè)結(jié)果均為陰性,特異性良好;PRoV、PoSaV和PAstV的檢測(cè)限量分別為1.38×10²、8.33×10²和4.40×10³拷貝數(shù)/μL,具有較好的敏感性。利用三重PCR和單重PCR方法同時(shí)對(duì)80份規(guī)�；i場(chǎng)的臨床腹瀉樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,3種病毒的樣品陽性率均為5.00%,2種方法的檢測(cè)結(jié)果相一致。本研究成功建立了同時(shí)PRoV、PoS... 

【文章來源】：畜牧與獸醫(yī). 2020,52(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 毒株與臨床病料樣品
        1.1.2 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        1.2.2 RNA的提取與反轉(zhuǎn)錄
        1.2.3 單重PCR擴(kuò)增
        1.2.4 三重PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
        1.2.5 特異性試驗(yàn)
        1.2.6 敏感性試驗(yàn)
        1.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)
        1.2.8 臨床樣品檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 單重PCR擴(kuò)增
    2.1 三重PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
    2.2 特異性試驗(yàn)
    2.3 敏感性試驗(yàn)
    2.4 重復(fù)性試驗(yàn)
    2.5 三重PCR檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2015—2017年東北地區(qū)豬星狀病毒ORF1b基因分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 楊丹,張備,朱金海,翟軍軍,孔凡志,孫東波.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2019(13)
[2]豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬輪狀病毒A多重?zé)晒舛縍T-PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 李軍,蔡良語,陳兵,劉建利,孫潔,陳書琨,林慶燕,陶虹,吳紹強(qiáng),盧體康,陳金頂,秦智鋒.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(09)
[3]國內(nèi)豬群中札幌病毒的感染狀況匯總（2007～2016年）[J]. 徐國棟,王磊.  中獸醫(yī)學(xué)雜志. 2018(05)
[4]豬流行性腹瀉病毒豬傳染性胃腸炎病毒豬Delta冠狀病毒和豬輪狀病毒多重RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 王睿敏,施開創(chuàng),黎宗強(qiáng),尹彥文,謝守玉,莫?jiǎng)偬m,陸文俊,屈素潔.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2019(02)
[5]豬札幌病毒的研究進(jìn)展[J]. 李晶嬌,沈權(quán),李飴,華修國.  微生物與感染. 2016(02)
[6]豬核轉(zhuǎn)錄因子C-Rel亞基的克隆及PRV體外感染PK-15細(xì)胞對(duì)C-Rel轉(zhuǎn)錄時(shí)相的影響[J]. 付夢(mèng)瑾,朱玲,周遠(yuǎn)成,楊文宇,李新瓊,徐志文.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(12)
[7]豬A群輪狀病毒和C群輪狀病毒以及豬星狀病毒多重RT-PCR同時(shí)檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J]. 楊文宇,周遠(yuǎn)成,韓燕,陳蕾,廖春燕,付夢(mèng)瑾,季洪偉,蔡雨涵,朱玲,徐志文,郭萬柱.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2014(04)
[8]豬流行性腹瀉病毒、傳染性胃腸炎病毒、A群輪狀病毒和嵴病毒多重RT-PCR檢測(cè)方法的建立及臨床應(yīng)用[J]. 霍金耀,鄭逢梅,陳陸,余秋穎,常洪濤,陳文定,明星,鄭關(guān)民,趙軍,王川慶.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(12)
[9]廣西豬星狀病毒分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 蘭家暖,劉磊,郭旋,張民秀,盧冰霞,黃福標(biāo),覃熊慧,張寧,黃偉堅(jiān).  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(08)
[10]札幌病毒研究進(jìn)展[J]. 吳瓊,張艷,鄭海學(xué),殷宏.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(06)

博士論文
[1]杯狀病毒分子流行病學(xué)及病原與宿主互作機(jī)制研究[D]. 沈權(quán).上海交通大學(xué) 2011

碩士論文
[1]2015～2016年中國部分地區(qū)豬輪狀病毒感染檢測(cè)及病毒分離與鑒定[D]. 喬成鵬.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2019
[2]豬病毒性腹瀉六重RT-PCR檢測(cè)方法的建立應(yīng)用及豬流行性腹瀉病毒的分離鑒定[D]. 丁光明.蘭州大學(xué) 2019
[3]豬腹瀉病原多重PCR檢測(cè)方法的建立及主要病毒進(jìn)化分析[D]. 孟麗.上海海洋大學(xué) 2017
[4]廣西豬星狀病毒分子流行病學(xué)調(diào)査及基因型分析[D]. 李勛杰.廣西大學(xué) 2015
[5]檢測(cè)五種腹瀉相關(guān)病毒多重RT-PCR方法的建立和2013年9月～2014年10月廣州地區(qū)腹瀉病原譜調(diào)查[D]. 羅欣.南方醫(yī)科大學(xué) 2015
[6]豬流行性腹瀉的流行病學(xué)調(diào)查及免疫保護(hù)試驗(yàn)的研究[D]. 陳靜.廣西大學(xué) 2013
[7]豬札幌樣病毒間接ELISA和熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立[D]. 陳琰.上海交通大學(xué) 2010



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