羊口瘡（Orf）,又名羊傳染性膿皰性皮炎,是由羊口瘡病毒（Orf Virus,ORFV）引起,主要感染山羊和綿羊的一種急性、接觸性人畜共患傳染病,ORFV具有強(qiáng)大的宿主免疫調(diào)節(jié)功能,可以通過編碼大量的免疫調(diào)節(jié)蛋白作用于宿主免疫或炎癥反應(yīng)通路實(shí)現(xiàn)對(duì)宿主的免疫調(diào)節(jié)作用。樹突狀細(xì)胞（Dendritic Cell,DC）是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)大的抗原呈遞細(xì)胞（Antigen Presenting Cells,APC）,在連接固有免疫和適應(yīng)性免疫中起著重要作用。然而ORFV是否能感染小鼠骨髓源DCs以及感染后對(duì)其產(chǎn)生的影響目前尚不清楚,故本試驗(yàn)以O(shè)RFV感染的小鼠骨髓源DCs為靶標(biāo),通過表達(dá)ORFV129蛋白、制備兔多抗血清,為間接免疫熒光檢測(cè)技術(shù)驗(yàn)證ORFV感染小鼠骨髓源DCs提供特異性抗體;然后通過表面標(biāo)志物檢測(cè)ORFV感染是否促進(jìn)DCs細(xì)胞的分化和成熟;最后對(duì)ORFV感染前、后引起DCs的差異蛋白質(zhì)組學(xué)進(jìn)行了分析。本研究的實(shí)施為成功分離小鼠骨髓源DCs提供了研究平臺(tái),也為進(jìn)一步揭示ORFV感染宿主的免疫機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。取得的結(jié)論如下:1.成功獲得了效價(jià)為1:3200的兔多抗血清;2.成功制... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁(yè)數(shù)】：92 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ORFV129基因PCR擴(kuò)增Fig.1-1PCRamplificationresultofORFV129

4 討論隨著養(yǎng)殖業(yè)的蓬勃發(fā)展，養(yǎng)羊業(yè)也迅猛發(fā)展，羊群數(shù)量不斷增加，飼養(yǎng)密度越來越大，在羊群之間各種疾病也越發(fā)明顯，羊口瘡是羊群中常見的疾病[65]，但由于缺乏有效的診治手段，該病在世界范圍內(nèi)仍有爆發(fā)，給世界各地的養(yǎng)殖行業(yè)造成不同程度的經(jīng)濟(jì)損失[66-67]，因此探討羊口瘡病毒的致病機(jī)理和保護(hù)性抗原的發(fā)展尤為重要。目前，對(duì)羊口瘡病毒基因功能的研究較少。ORFV129 基因位于羊口瘡病毒基因組 C’端反向末端重復(fù)序列區(qū)，該基因編碼的錨蛋白是由多個(gè) ANK 序列組成，這類蛋白數(shù)量眾多，形成很大的痘病毒家族蛋白[68]，研究表明，orf 基因中編碼 ANK 蛋白的部分基因能夠結(jié)合抗病A、B：對(duì)照組；C、D：實(shí)驗(yàn)組A、B:Control；C、D:Test圖 1-7.兔抗 ORFV129 蛋白多克隆抗體的間接免疫熒光檢測(cè)Fig1-7. IFA of application of rabbit anti-ORFV129 polyclonal antibody

3.4ORFV 對(duì) CD11C+細(xì)胞比例的影響將培養(yǎng)六天的 DCs 用 CD11c-PE 抗體標(biāo)記后經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) DC 的純度，其細(xì)度達(dá)到 75%以上（如圖 2-3）。為了檢測(cè) ORFV 對(duì) CD11c+細(xì)胞比例的影響，用倍的 ORFV 病毒刺激培養(yǎng)至第六天的 DCs，24h 后采用 PE-CD11c 抗體進(jìn)行染色，細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，F(xiàn)LOW 軟件分析 CD11C+的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，LPS、OR-1）、ORFV（10-2）、ORFV（10-3）、門控內(nèi)的 CD11c+細(xì)胞的比例均無(wú)顯著的影響A：未染色細(xì)胞；B：DAPI 核染；C：FITC 染色；D：A、B、C 疊加圖圖 2-2 ORFV 感染 DCs 間接免疫熒光檢測(cè)A:Unstained cells；B:DAPI nuclear staining；C:FITC staining；D:A，B，CoverlayFig2-2. IFA of application of DCs infected by ORFV

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]羊口瘡病毒感染宿主細(xì)胞的蛋白質(zhì)組變化及功能分析[D]. 孔漢金.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
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[3]實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠下丘腦組織蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 鄭麗.河北醫(yī)科大學(xué) 2011



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