原始生殖細胞（Primordial germ cells,PGCs）經(jīng)體外培養(yǎng)后可形成胚胎生殖細胞（Embryonic germ cells, EGCs）。胚胎發(fā)育初期,單能性的PGCs向生殖嵴遷移的同時大量增殖,進入生殖嵴后,PGCs經(jīng)歷了表觀遺傳重編程并最終分化為配子；在體外適宜的培養(yǎng)條件下,PGCs向生殖細胞的特化被阻斷,重編程為能夠自我更新且具多向分化潛能的EGCs。目前,對于該過程機制的研究主要集中在小鼠上,豬上的報道多是關于EGC建系的嘗試和PGC特化相關的表觀遺傳學調控的研究,而對于豬PGCs本身生物學特性、特別是其重編程過程中多能性、生殖系標志基因表達模式的研究鮮有報道。然而,該方面的探索不僅有利于豬EGCs的最終建系,還對豬生殖細胞體內發(fā)育機制的闡述具有重要意義。鑒于此,本課題以豬PGC為研究對象,探索了PGCs體外重編程為EGCs過程中的生長行為變化,多能性、生殖系標志基因及信號通路受體的表達模式,以及bFGF在該過程中的作用,從而為探索豬PGCs體外重編程的作用機理和最終獲得具有多能性且穩(wěn)定傳代的EGCs提供理論基礎。主要研究結果如下：（1）通過組織切片的HE染色... 

【文章來源】：東北農業(yè)大學黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 胚胎干細胞研究進展
        1.1.1 胚胎干細胞(ESCs)的研究進展
        1.1.2 豬胚胎干細胞(ESCs)的研究進展
    1.2 哺乳動物原始生殖細胞的發(fā)育
        1.2.1 原始生殖細胞的特化
        1.2.2 原始生殖細胞的遷移
        1.2.3 原始生殖細胞甲基化的去除與重建
    1.3 影響原始生殖細胞重編程的細胞因子
        1.3.1 白血病抑制因子(1euckemia inhibitory factor,Lif)
        1.3.2 干細胞因子(Stem Cell Factors,SCF)
        1.3.3 骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)
        1.3.4 腺苷酸環(huán)化酶激活劑(Forskolin)
        1.3.5 堿性成纖維生長因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)
    1.4 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要儀器設備
        2.1.3 主要試劑及試劑盒
        2.1.4 常用試劑及配制
        2.1.5 主要的生物信息學網(wǎng)站及分析軟件
    2.2 實驗方法
        2.2.1 豬生殖嵴組織學切片制作
        2.2.2 豬生殖嵴的蘇木素-伊紅染色
        2.2.3 豬生殖嵴的堿性磷酸酶染色
        2.2.4 豬原始生殖細胞的培養(yǎng)
        2.2.5 豬原始生殖細胞的堿性磷酸酶檢測
        2.2.6 豬原始生殖細胞的分化能力檢測
        2.2.7 免疫熒光檢測
        2.2.8 基因表達檢測
3 結果
    3.1 豬胚胎生殖嵴的發(fā)育
    3.2 豬原始生殖細胞的生物學特性
        3.2.1 豬原始生殖細胞的獲得
        3.2.2 豬原始生殖細胞的生長行為
        3.2.3 豬類胚胎生殖細胞的體外分化
        3.2.4 豬類胚胎生殖細胞的多能性及生殖系基因的表達
    3.3 bFGF對原始生殖細胞克隆形成的影響
        3.3.1 豬類胚胎生殖細胞表面受體的表達
        3.3.2 堿性成纖維生長因子對原始生殖細胞克隆形成的影響
4 討論
    4.1 豬原始生殖細胞的生長行為
    4.2 bFGF對豬原始生殖細胞重編程的影響
    4.3 生殖系基因在豬類胚胎生殖細胞中的表達
        4.3.1 Blimp1在類胚胎生殖細胞中的表達
        4.3.2 Stella在類胚胎生殖細胞中的表達
        4.3.3 Ifitm3在類胚胎生殖細胞中的表達
        4.3.4 Nanos1在類胚胎生殖細胞中的表達
    4.4 多能性基因在豬類胚胎生殖細胞中的表達
5 結論
致謝
參考文獻
攻讀碩士期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]The culture and establishment of embryonic germ（EG）cell lines from Chinese mini swine[J]. HSIAO CHIEN TSUNG.  Cell Research. 2003(03)



本文編號：3439750