發(fā)布時間：2021-10-16 09:52

　　先天免疫作為機體的第一道防線,在抵抗病原入侵和誘導(dǎo)后天免疫的過程中發(fā)揮著重要的作用。TRAF-3和TRAF-6作為TRAF家族的兩個重要成員,其在哺乳動物的先天抗病毒免疫過程中發(fā)揮著重要的作用,但是其是否也參與了雞的先天抗病毒免疫通路呢?本試驗首先通過設(shè)計特異的引物對雞的TRAF3.TRAF6基因的CDS區(qū)進行克��；然后通過定量PCR技術(shù),分析了TRAF-3和TRAF-6基因在雞心、肝、脾等共11個組織中表達分布；接著我們分別轉(zhuǎn)染雙鏈的DNA-Poly（dA:dT）和雙鏈的RNA-Poly（I:C）進入雞的胚胎成纖維細胞,通過Real-time PCR檢測TRAF3、TRAF6基因及其下游基因在雞胚成纖維細胞抵抗外源的DNA和RNA免疫過程中的表達量的變化；同時我們采用細胞攻毒試驗,分析了TRAF3、TRAF6基因及其下游基因在雞胚成纖維細胞感染新城疫病毒后的表達變化,進一步確定其在雞抗病毒免疫過程中的作用。最后我們選用將80只10日齡SPF白來航雛雞,分別通過腹腔注射注射接種0.1m1中等毒力和標準強毒病毒稀釋液病毒。在感染新城疫病毒后24h、48h、96h進行采樣。其中攻毒組每次采... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
常用詞語縮寫
1. 文獻綜述
    1.1 抗病育種與先天免疫
        1.1.1 抗病育種
        1.1.2 開展抗病育種的現(xiàn)實困難和目標
        1.1.3 抗病育種的主要手段
    1.2 先天免疫
        1.2.1 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子TRAFs(TRAF的家族)
        1.2.2 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子3/6的發(fā)現(xiàn)
        1.2.3 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子3/6分子結(jié)構(gòu),分子作用機制
        1.2.4 TRAF3的功能
        1.2.5 TRAF6的功能
    1.3 研究目的和意義
2. 材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 試驗樣品
        2.1.2 試劑與耗材料
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 所用試劑的配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 引物設(shè)計與合成
        2.2.2 總RNA提取
        2.2.3 cDNA模板的制備
        2.2.4 目的基因普通PCR的擴增
        2.2.5 DNA片段的克隆測序
        2.2.6 雞胚成纖維細胞的制備
        2.2.7 轉(zhuǎn)染雞胚成纖維肌細胞
        2.2.8 雞胚成纖維肌細胞RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.2.9 實時熒光定量PCR
        2.2.10 統(tǒng)計分析
3. 結(jié)果與分析
    3.1 TRAF3和TRAF6的克隆、測序
        3.1.1 RNA抽提結(jié)果
        3.1.2 PCR擴增結(jié)果
        3.1.3 雞TRAF3基因的克隆、氨基酸序列比對
        3.1.4 雞TRAF6基因的克隆、序列
    3.2 TRAF3和T-AF6在雞的肝、脾、腎等組織中的表達分布
    3.3 雞胚成纖維細胞抗病毒免疫過程中的作用
        3.3.1 不同濃度的Ploy(dA：dT)轉(zhuǎn)染CEF后TRAF3/6及其下游基因的表達情況
        3.3.2 不同濃度的Ploy(I：C)轉(zhuǎn)染CEF后TRAF3/6及其下游基因不同時間點的表達情況
        3.3.3 Ploy(dA：dT)轉(zhuǎn)染CEF后TRAF3/6及其下游基因不同時間點的表達情況
        3.3.4 Ploy(I：C)轉(zhuǎn)染CEF后TRAF3/6及其下游基因不同時間點的表達情況
        3.3.5 NDV不同滴度M毒株轉(zhuǎn)染CEF后TRAF3/6及其下游基因的表達情況
        3.3.6 不同毒力毒株感染轉(zhuǎn)染CEF后TRAF3/6及其下游基因不同時間點的表達情況
        3.3.7 標準強毒NDV與中等毒力NDV感染機體后胸腺中TRAF3/6及其下游基因不同時間點的表達情況
        3.3.8 標準強毒NDV與中等毒力NDV感染機體后脾臟中TRAF3/6及其下游基因不同時間點的表達情況
        3.3.9 標準強毒NDV與中等毒力NDV感染機體后法氏囊中TRAF3/6及其下游基因不同時間點的表達情況
4 討論
    4.1 TRAF3和TRAF6的克隆
    4.2 TRAF3和TRAF6在未感染機體中各個組織器官中的表達
    4.3 Poly(dA：dT)轉(zhuǎn)染對TRAF3、TRAF6及其下游基因相對表達量的影響
    4.4 Poly(I：C)轉(zhuǎn)染對TRAF3、TRAF6及其下游基因相對表達量的影響
    4.5 NDV不同滴度和強弱毒株NDV轉(zhuǎn)染CEF后TRAF3、TRAF6及其下游基因相對表達量的影響
    4.6 新城疫病毒對不同時期免疫組織中TRAF3、TRAF6及其下游基因相對表達量的影響
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文情況


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3439593