發(fā)布時間：2017-05-03 07:16

  本文關(guān)鍵詞：陜西省豬偽狂犬病調(diào)查及其病毒基因序列分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：豬偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一種急性傳染病,最早在1813年于美國被發(fā)現(xiàn),目前已廣泛分布于全球50多個國家和地區(qū)。目前,歐洲一些國家通過采用基因缺失疫苗結(jié)合野毒株抗體ELISA檢測方法,已控制或根除了豬偽狂犬病。我國大多數(shù)豬場也在廣泛使用豬偽狂犬病基因缺失疫苗,使發(fā)病趨勢從區(qū)域流行到散發(fā)流行,發(fā)病率有較大程度的降低。但近年來該病又有所抬頭,潛伏感染的情況依然嚴(yán)重。為了解陜西省各地市規(guī)�；i場中豬偽狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)野毒感染情況,本研究對全省11個地市不同規(guī)模的免疫豬場不同批次的1240份血清樣品用gE-ELISA抗體檢測試劑盒進(jìn)行了PRV野毒抗體檢測。結(jié)果顯示,陜西省各地市的PRV野毒抗體陽性率從0到46.44%不等;抗體平均陽性率為18.46%,豬場平均陽性率高達(dá)46.59%,各地市豬場陽性率從0到100%不等。2015年11月,陜西省漢中市某規(guī)模豬場出現(xiàn)仔豬發(fā)熱、嘔吐、腹瀉等臨床癥狀,同時伴有神經(jīng)癥狀的出現(xiàn):如四肢僵硬、肌肉震顫等。經(jīng)藥物治療無效,出現(xiàn)以上癥狀2~3d后接連死亡,其病死率高達(dá)100%。剖檢病死仔豬,主要病理變化表現(xiàn)為腦膜充血、淤血,肝臟邊緣有壞死,肺臟充血、水腫等。根據(jù)臨床癥狀及病理變化,初步診斷為豬偽狂犬病,隨后我們采集病死豬的肺臟、肝臟、脾臟、腎臟、心臟等器官及腦組織、小腸內(nèi)容物和血液等病料,通過PCR檢測、病原分離、電鏡負(fù)染觀察以及動物接種試驗,確診為PRV野毒感染所致。通過對分離鑒定的陜西省漢中市PRV地方毒株HZ-2015株的g E、g B基因克隆,并對其毒力基因的核苷酸序列及推導(dǎo)的氨基酸序列與國內(nèi)外已分離鑒定的多株P(guān)RV進(jìn)行同源性比較分析,繪制基因進(jìn)化樹,了解和掌握PRV HZ-2015株遺傳變異狀況,為陜西省豬偽狂犬病防控措施的制定提供了科學(xué)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：豬偽狂犬病 流行病學(xué)調(diào)查 病毒分離鑒定 聚合酶鏈反應(yīng) gE基因
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.28
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-11
• 文獻(xiàn)綜述11-19
• 第一章 豬偽狂犬病研究進(jìn)展11-19
• 1.1 豬偽狂犬病的病原學(xué)11-15
• 1.1.1 偽狂犬病病毒概述11
• 1.1.2 偽狂犬病病毒的結(jié)構(gòu)和生物分子學(xué)特性11-14
• 1.1.3 PRV的毒力基因及主要蛋白14-15
• 1.2 豬偽狂犬病的流行現(xiàn)狀15-16
• 1.3 豬偽狂犬病的診斷方法16-17
• 1.3.1 PRV抗原檢測方法16-17
• 1.3.2 PRV抗體檢測方法17
• 1.4 豬偽狂犬病的防控措施17-19
• 1.4.1 疫苗免疫預(yù)防17-18
• 1.4.2 綜合防控措施18-19
• 試驗研究19-49
• 第二章 陜西省豬偽狂犬病血清流行病學(xué)調(diào)查及分析19-25
• 2.1 材料與方法19-21
• 2.1.1 血清樣品19
• 2.1.2 主要試劑19
• 2.1.3 儀器與耗材19-20
• 2.1.4 血清樣本的制備20
• 2.1.5 待檢血清中PRV野毒抗體水平的檢測20
• 2.1.6 結(jié)果判定20-21
• 2.2 結(jié)果21-22
• 2.2.1 陜西省不同市縣送檢血清的PRV野毒抗體陽性率21
• 2.2.2 不同年齡段豬群血清中PRV野毒抗體陽性率21-22
• 2.2.3 不同季節(jié)豬血清樣品中PRV野毒抗體陽性率22
• 2.3 討論22-23
• 2.4 小結(jié)23-25
• 第三章 豬偽狂犬病陜西HZ-2015株的分離與鑒定25-37
• 3.1 材料與方法25-26
• 3.1.1 病料來源25
• 3.1.2 病毒、細(xì)胞25
• 3.1.3 實驗動物25
• 3.1.4 主要試劑25
• 3.1.5 主要儀器25-26
• 3.2 方法26-28
• 3.2.1 病理剖檢及病料采集26
• 3.2.2 PRV基因組DNA的提取26
• 3.2.3 RT-PCR鑒定26-27
• 3.2.4 PK-15細(xì)胞的復(fù)蘇27
• 3.2.5 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)27
• 3.2.6 病毒分離27
• 3.2.7 空斑純化27-28
• 3.2.8 純化病毒電鏡負(fù)染觀察28
• 3.2.9 PRV TCID_(50)的測定28
• 3.2.10 家兔感染試驗28
• 3.3 結(jié)果28-35
• 3.3.1 病料檢測結(jié)果28-30
• 3.3.2 病毒的分離30-31
• 3.3.3 病毒的空斑形態(tài)31-32
• 3.3.4 病毒粒子形態(tài)32-33
• 3.3.5 病毒滴度33
• 3.3.6 家兔感染試驗33-35
• 3.4 討論35-36
• 3.5 小結(jié)36-37
• 第四章 PRV HZ-2015株gE和gB基因的克隆及序列分析37-49
• 4.1 材料與方法37-42
• 4.1.1 病毒、菌株、細(xì)胞和質(zhì)粒37
• 4.1.2 病料來源37
• 4.1.3 主要試劑37-38
• 4.1.4 病毒上清液DNA的提取38
• 4.1.5 引物的設(shè)計38
• 4.1.6 目的片段的擴(kuò)增38
• 4.1.7 制膠與電泳38
• 4.1.8 PCR產(chǎn)物的純化38-39
• 4.1.9 鏈接反應(yīng)39
• 4.1.10 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化39
• 4.1.11 質(zhì)粒的提取39-40
• 4.1.12 重組質(zhì)粒PCR鑒定40
• 4.1.13 重組質(zhì)粒的測序與基因進(jìn)化樹的構(gòu)建40-42
• 4.2 結(jié)果42-48
• 4.2.1 gE和gB基因的PCR擴(kuò)增42
• 4.2.2 gE、gB基因陽性質(zhì)粒的鑒定42
• 4.2.3 PRV HZ-2015分離株gE基因序列分析結(jié)果42-45
• 4.2.4 PRV HZ-2015分離株gB基因序列分析結(jié)果45-48
• 4.3 討論48
• 4.4 小結(jié)48-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-57
• 致謝57-58
• 作者簡介58

【相似文獻(xiàn)】

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