為了制備高靈敏度、高特異性的抗新霉素單鏈抗體,試驗(yàn)采用從雜交瘤細(xì)胞中提取單鏈抗體基因,轉(zhuǎn)入大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)。然后采用分子對(duì)接的方法研究抗新霉素單鏈抗體和新霉素分子的識(shí)別機(jī)制并進(jìn)行虛擬突變,將關(guān)鍵結(jié)合位點(diǎn)的氨基酸殘基進(jìn)行突變,在對(duì)突變體進(jìn)行表達(dá)和純化后建立間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附分析方法。結(jié)果表明:氨基酸殘基Leu227為單鏈抗體與新霉素結(jié)合的關(guān)鍵氨基酸殘基,將其突變?yōu)锳sp,獲得突變體。IC₅₀為1.58 ng/mL,相比于親本單鏈抗體的26.23 ng/mL,突變體的敏感性提高了16.6倍。試驗(yàn)成功制備了高靈敏度、高特異性的抗新霉素單鏈抗體,為動(dòng)物源性食品中的抗生素殘留檢測(cè)提供了研究基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,48(20)

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

VH、VL、ScFv基因擴(kuò)增

Western Blot分析抗NEO-ScFv

通過SDS-PAGE分析純化后ScFv

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雞蛋細(xì)菌耐藥性檢測(cè)試驗(yàn)報(bào)告[J]. 李爽,張燕,張潔瓊.  科學(xué)種養(yǎng). 2020(08)
[2]高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立同時(shí)測(cè)定肌肉組織中4種藥物殘留的方法及其確認(rèn)[J]. 夏玲玲.  科技資訊. 2020(03)
[3]高效液相色譜-脈沖安培電化學(xué)檢測(cè)器法替代微生物檢定法測(cè)定硫酸新霉素效價(jià)的研究[J]. 黃敏文,侯玉榮,張倩,杭太俊,張玫,袁耀佐.  中國(guó)藥學(xué)雜志. 2020(02)
[4]HPLC-CAD法測(cè)定硫酸新霉素中新霉素B、新霉素C、新霉胺及其他有關(guān)物質(zhì)[J]. 劉莊蔚,朱健萍,梁秋霞,蔣潔,楊欣智.  中國(guó)抗生素雜志. 2019(03)
[5]HPLC-MS/MS法測(cè)定飼料中硫酸新霉素的含量[J]. 張靜,趙立軍,李云.  飼料研究. 2017(11)
[6]進(jìn)出口動(dòng)物中新霉素ELISA檢測(cè)方法的建立[J]. 孫明君,邱芳,張金玲,鄭小龍.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2016(12)
[7]新霉素在獸醫(yī)方面的應(yīng)用[J]. 古麗努爾·阿巴斯.  當(dāng)代畜牧. 2016(29)
[8]氨基糖苷類藥物的危害及其檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J]. 高月,王耀,胡驍飛,鄧瑞廣,侯玉澤.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(06)
[9]轉(zhuǎn)基因棉花中新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（NPTⅡ）雙抗體夾心ELISA定量檢測(cè)方法的建立[J]. 王新桐,孫佳芝,高麗麗,楊正友,柴同杰.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2014(03)
[10]歐盟:修訂新霉素在動(dòng)物源食品上的殘留限量[J].   中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)報(bào). 2013(11)



本文編號(hào)：3423833