在生命科學(xué)研究中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是最基本的四要素之一，但其是四要素中的制約性要素，會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)研究的質(zhì)量和水平。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)科學(xué)研究準(zhǔn)確性和可重復(fù)性的重要保障。自1994年起，我國發(fā)布了許多的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，以保障我國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物業(yè)實(shí)現(xiàn)法制化的管理和標(biāo)準(zhǔn)化的應(yīng)用。而在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中，小鼠肝炎病毒和泰澤病原體是常見的檢測(cè)項(xiàng)目之一。目前，用于小鼠肝炎病毒和泰澤病原體的檢測(cè)方法主要是免疫熒光試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。此類方法檢出率低，對(duì)感染初期的檢測(cè)無效，也無法用于免疫缺陷的檢測(cè)對(duì)象。本研究分別將PCR擴(kuò)增技術(shù)與SNaPshot技術(shù)和反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)相結(jié)合，根據(jù)小鼠肝炎病毒和泰澤病原體基因組序列設(shè)計(jì)特異性的引物和探針，經(jīng)過一系列條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，建立小鼠肝炎病毒和泰澤病原體的反向斑點(diǎn)雜交方法，并初步探討了其應(yīng)用；建立一種分別檢測(cè)MHV1、MHV3、JHM、A59四種常見毒株的快速靈敏特異的SNaPshot新方法。本研究由兩部分組成：第一部分反向斑點(diǎn)雜交檢測(cè)小鼠肝炎病毒和泰澤病原體方法的建立及初步應(yīng)用第一節(jié)小鼠肝炎病毒反向斑點(diǎn)雜交檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用目的建立一種反向斑點(diǎn)雜交方法... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

MHVcDNAPCR擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文交 1h、1.5h、2h，在 45oC、50oC 洗膜 20min，在 37oC 與 1:2000、1:5000、度的 SA-AP 孵育 0.5h、1h、1.5h，顯色 10min、20min、30min。結(jié)果當(dāng)為：探針Ⅰ和探針Ⅱ均修飾 20C，濃度為 50μmol/L；雜交溫度為 45oC，為 1h；洗膜溫度為 45oC；抗體濃度為 1:2000，孵育時(shí)間為 1h；顯色時(shí)間n 時(shí)，各斑點(diǎn)信號(hào)強(qiáng)度較好，無非特異性染色（圖 1.2）。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

MHV 特異性和靈敏性、金黃色葡萄球菌和乙型肝炎病毒 種毒株混合物。 檢測(cè)結(jié)果：沙門陽性，特異性為 100%（圖 1.4）。R 產(chǎn)物濃度最低為 5ng/μL 時(shí)，可檢V-A59反向斑點(diǎn)雜交試劑條穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)ility test of RDB examination of MHV-As of different storage times at 37oC 1. 1d; d1 2 3 4 5 6 7 8

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]定性測(cè)定羊奶中黃曲霉毒素M1殘留的高靈敏度檢測(cè)卡的研制[J]. 武玉香,沈志強(qiáng),唐士云.  畜牧與獸醫(yī). 2013(08)
[2]反向線性探針雜交在檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物沙門菌中的研究[J]. 魏立雯,韋莉,張文露,潘永全,譚毅,賴國旗,徐永柱.  四川動(dòng)物. 2013(02)
[3]SNaPshot技術(shù)檢測(cè)Y-SNP位點(diǎn)O3-M122單倍群的應(yīng)用[J]. 孫亞男,李安,史斌,董慶旭,李貌,何瑋,翟滇,程寶文.  中國法醫(yī)學(xué)雜志. 2013(01)
[4]金黃色葡萄球菌反向線性雜交探針檢測(cè)方法的建立[J]. 韋莉,魏立雯,賴國旗,譚毅,張文露,潘永全.  中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào). 2012(06)
[5]小鼠慢性病毒性肝炎誘發(fā)肝脂肪變性模型的構(gòu)建[J]. 甘露,張哲,郭進(jìn)強(qiáng),謝茜,蒙子君,萬為人,羅炳德.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(12)
[6]TGF-β1在MHV-3誘導(dǎo)的小鼠暴發(fā)型肝炎模型中的表達(dá)研究[J]. 吳迪,王洪武,寧琴.  中國醫(yī)藥科學(xué). 2012(07)
[7]TNF-α在MHV-3誘導(dǎo)的小鼠病毒性肝炎模型腎臟中的表達(dá)及意義[J]. 陸玉蕾,林有智,王曉晶,嚴(yán)偉明,寧琴.  中國醫(yī)藥科學(xué). 2012(06)
[8]反向線性探針雜交技術(shù)檢測(cè)慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐藥研究[J]. 賴國旗,張文露,胡源,唐紅,張磊,謝素蘭,潘玥,魏立雯,黃愛龍.  西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2012(03)
[9]藏茵陳對(duì)MHV-A59病毒感染濕熱證小鼠肝臟損傷的干預(yù)作用[J]. 蘇麗賢,湯朝暉,萬為人,郭進(jìn)強(qiáng),羅炳徳,林培政.  時(shí)珍國醫(yī)國藥. 2011(08)
[10]小鼠肝炎病毒金標(biāo)快速檢測(cè)方法的建立[J]. 胡曉燕,佟巍,劉先菊,張麗芳,劉云波.  中國畜牧獸醫(yī). 2011(07)

碩士論文
[1]小鼠肝炎病毒N基因的表達(dá)與間接ELISA檢測(cè)方法的建立和應(yīng)用[D]. 周艷.揚(yáng)州大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3422600