眾所周知,豬偽狂犬病毒病被定義為極難防疫的自然疫源性疾病,在全球范圍內(nèi)廣泛傳播,其中歐美一些國家已具備有效的疾病防控手段和撲殺程序,但在第三世界國家,仍無法對該病進(jìn)行有效的防控。在我國,豬偽狂犬病疫情曾一度通過疫苗免疫的手段得到控制,但于2010年起,豬偽狂犬病病毒在我國發(fā)生了大范圍的突變,從而導(dǎo)致2010年以前我國建立的防控措施效果大幅下降,致使該病在全國范圍內(nèi)再次呈爆發(fā)趨勢。為了滿足我國現(xiàn)階段豬偽狂犬病病毒（PRV）抗原高頻突變引發(fā)新疫情診斷的需求,本實驗通過生物信息學(xué)分析比較,設(shè)計合成了多個針對PRV gB、gC、gG 3種糖蛋白高度保守的抗原優(yōu)勢表位區(qū)肽段,分別命名為gB₈₇₂、gC₁₄₄和gG₂₃₇。分別以此三條肽段為抗原包被物,經(jīng)過條件優(yōu)化建立了PRV-gB間接ELISA抗體檢測方法。該ELISA方法檢測結(jié)果顯示,僅對PRV血清檢測為陽性,與豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、口蹄疫病毒（O型）、豬細(xì)小病毒、豬圓環(huán)病毒2型等主要豬源病毒陽性血清均無特異性反應(yīng),表明具有良好的特異性;與OIE推薦使用的荷蘭BioC... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PRV病毒體的結(jié)構(gòu)

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)2019屆碩士學(xué)位論文第一章緒論5圖2.PRV基因組。（引自：T.C.Mettenleiter.PseudorabiesVirus[M].ElsevierInc.:2008-06-15.）圖中顯示了從完整基因組序列推導(dǎo)出的轉(zhuǎn)錄物和基因組織。PRV基因組的線性形式包括獨(dú)特的長序列（UL），內(nèi)部反向重復(fù)序列（IRS），獨(dú)特的短序列（US）和末端反向重復(fù)序列（TRS）。顯示了蛋白質(zhì)編碼區(qū)的預(yù)測位置，50和30個非翻譯區(qū)，DNA重復(fù)，剪接位點和DNA復(fù)制的起源。

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)2019屆碩士學(xué)位論文第三章間接ELISA方法的優(yōu)化283.3實驗結(jié)果3.3.1PRV-gB肽段間接ELISA檢測方法臨界值的確定使用上述完成優(yōu)化的PRVgB間接ELISA方法，檢測100份PRV陽、陰性的血清樣品，計算陰性血清與陽性血清OD450nm差值（結(jié)果詳見表3）。統(tǒng)計結(jié)果顯示，標(biāo)準(zhǔn)陰性O(shè)D450nm平均值為0.385，標(biāo)準(zhǔn)陽性O(shè)D450nm平均值為1.006。根據(jù)公式S/P=（樣本OD450nm值-OD450nm陰性對照平均值）/（陽性對照平均OD450nm值-OD450nm陰性對照平均值）以及陰陽性血清的檢測結(jié)果，經(jīng)計算確定S/P≥0.56為陽性，S/P＜0.56為陰性。3.3.2特異性實驗應(yīng)用本實驗建立的ELISA方法進(jìn)行特異性檢測，同時與荷蘭BioCheck公司以及深圳芬德生物公司的同類產(chǎn)品對PRRSV、PPV、PCV2、CSFV、FMDV(O)等5份陽性血清樣品進(jìn)行平行檢測，表明該5份樣品均為PRV陰性，與其它常見病毒的陽性血清均無交叉反應(yīng)（圖3），表明該ELISA方法特異性較強(qiáng)。BioCheck公司產(chǎn)品界定標(biāo)準(zhǔn)，S/P值>0.5為陽性判定，BioCheck抗體檢測試劑盒的檢測結(jié)果亦表明對上述5份樣品均為偽狂犬病病毒陰性（圖3），與本實驗室建立的ELISA方法結(jié)果一致。然而，使用國內(nèi)市售芬德AntibodyTestKit檢測上述5份血清樣品，以其界定的檢測標(biāo)準(zhǔn)OD450nm值≥0.38為偽狂犬病病毒陽性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該抗體檢測試劑盒檢測上述五份單一陽性血清均呈現(xiàn)PRV陽性（圖3），與本實驗室建立的ELISA方法及BioCheck公司產(chǎn)品檢測結(jié)果相差極大。圖3.本實驗建立的ELISA與國內(nèi)外商品化抗體檢測試劑盒比對分析Figure3.ComparativeanalysisbetweencommercializedELISAkitsandthekitdevelopedinthisstudy由此可知，本實驗室建立的PRV-gB多肽間接ELISA檢測方法特異性明顯優(yōu)于芬德抗體檢測試劑盒所檢測結(jié)果，與國外同類進(jìn)口抗體檢測試劑盒檢測結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬偽狂犬病病毒gE蛋白間接ELISA抗體檢測方法的建立[J]. 寇曉晶,高峰,郭慧琳,劉劍鋒.  中國動物檢疫. 2018(05)
[2]新流行豬偽狂犬病的臨床發(fā)病規(guī)律和防控措施[J]. 陸春延,張有惠,李菊峰.  養(yǎng)豬. 2017(06)
[3]豬偽狂犬病的致病機(jī)制與防控措施[J]. 廖飛,黃增榮,趙孝木,莫心虎,吳通奎,姜艷,黃功明,楊先富.  貴州畜牧獸醫(yī). 2015(01)
[4]2014年豬病流行情況與2015年流行趨勢及防控對策[J]. 楊漢春.  豬業(yè)科學(xué). 2015(02)
[5]豬偽狂犬病病毒變異株的分離鑒定及其gE基因的分子特征[J]. 趙鴻遠(yuǎn),彭金美,安同慶,李琳,冷超糧,陳家锃,王倩,常丹,張秋月,蔡雪輝,童光志,田志軍.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2014(07)
[6]偽狂犬病病毒Ra株體外感染ST細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的研究[J]. 郭劍英,張曉戰(zhàn),黃紅亮,許冬蕾,劉碧濤,任常寶,邵定勇,唐兆新.  中國畜牧獸醫(yī). 2013(11)
[7]我國豬偽狂犬病的最新流行動態(tài)與防控措施[J]. 全炎銘.  北方牧業(yè). 2013(12)
[8]豬偽狂犬病病毒新流行株的分離鑒定及抗原差異性分析[J]. 彭金美,安同慶,趙鴻遠(yuǎn),劉益民,陳家锃,冷超糧,孫艷,常丹,田志軍,童光志.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2013(01)
[9]河南省豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查[J]. 王軍,張秀鳳,王瑞.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(04)
[10]豬偽狂犬病病毒的分離鑒定[J]. 楊慶芳,寧官保,李俊達(dá).  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(08)

博士論文
[1]吉林省豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查與防控措施的研究及應(yīng)用[D]. 初小輝.吉林大學(xué) 2011
[2]偽狂犬病毒上海株P(guān)K～-缺失株及PK～-gG～-雙缺失株的構(gòu)建及免疫原性初步研究[D]. 黃偉堅.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006

碩士論文
[1]山東地區(qū)豬偽狂犬病的流行病學(xué)調(diào)查[D]. 范龍敏.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]豬偽狂犬病的流行病學(xué)調(diào)查及防治[D]. 伏鵬.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]山東省豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查及發(fā)病相關(guān)因素分析[D]. 王紅巖.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[4]山東省部分地區(qū)規(guī)�；i場偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查[D]. 鄭霞.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[5]豬偽狂犬病病毒、豬乙型腦炎病毒LAMP檢測方法的建立[D]. 王樹芬.河南科技大學(xué) 2012
[6]豬偽狂犬病毒結(jié)構(gòu)蛋白gB和gD主要抗原區(qū)的原核表達(dá)以及豬血清PRVgB抗體間接ELISA檢測方法的建立[D]. 羅飛.揚(yáng)州大學(xué) 2010
[7]南安市豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查及防控措施[D]. 張清燕.福建農(nóng)林大學(xué) 2009
[8]我國部分規(guī)�；i場偽狂犬病野毒感染狀況調(diào)查及其凈化方案的初步研究[D]. 賀紀(jì)云.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[9]福建省豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查研究[D]. 吳順意.揚(yáng)州大學(xué) 2006
[10]偽狂犬病病毒gE糖蛋白主要抗原區(qū)的原核表達(dá)及gE抗體間接ELISA檢測方法的初步建立[D]. 柴虹.揚(yáng)州大學(xué) 2006



本文編號：3419134