卵母細(xì)胞冷凍保存是一種具有潛在價值的技術(shù),也是輔助生殖領(lǐng)域最具發(fā)展的研究之一。豬卵母細(xì)胞的冷凍保存及體外培養(yǎng)對于胚胎干細(xì)胞研究有很大的醫(yī)學(xué)價值,但目前對于凍融后豬卵母細(xì)胞的體外培養(yǎng)和胚胎生產(chǎn)仍然落后,可能是由于在凍存過程中低溫對卵母細(xì)胞造成的冷凍損傷,影響卵母細(xì)胞的質(zhì)量。本試驗主要目的是探究在玻璃化冷凍液中添加冷凍保護(hù)劑CLC（甲基-β-環(huán)糊精）是否對凍融后的豬GV期卵母細(xì)胞成熟率,透明帶硬化時間、凋亡蛋白表達(dá)量及精卵結(jié)合產(chǎn)生影響。將凍融后的GV期卵母細(xì)胞通過體外成熟培養(yǎng)、透明帶熱溶解、蛋白免疫印跡（WB）等試驗檢測豬卵母細(xì)胞質(zhì)量。新鮮豬精液的常規(guī)檢測是作為輔助檢測精卵結(jié)合的重要過程。設(shè)置添加濃度為0 mg/ml CLC的空白對照組,和添加濃度為0.5mg/ml、5mg/ml、1 mg/ml CLC的處理組,冷凍保存兩周后的GV期卵母細(xì)胞進(jìn)行體外成熟培養(yǎng),結(jié)果顯示:1.添加濃度為5mg/ml CLC時卵母細(xì)胞成熟率最高（74.67±4.67%）,顯著高于對照組（P<0.05）。添加濃度為5mg/ml CLC時透明帶硬化時間最短,顯著低于對照組（P<0.05）。2.添加濃度為... 

【文章來源】：延邊大學(xué)吉林省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１．不同濃度ＣＬＣ對ＧＶ期凍融后的豬卵母細(xì)胞體外成熟影響

中添加濃度為５?ｍｇ／ｍＬ?ＣＬＣ處理組的卵母細(xì)胞成熟率顯著高于對照組和０．５??ｍｇ／ｍＬ?ＣＬＣ?處理組（Ｐ＜０．０５）。??圖３－１．不同濃度ＣＬＣ對ＧＶ期凍融后的豬卵母細(xì)胞體外成熟影響。??Ａ．Ｏ?ｍｇ／ｍＬ?ＣＬＣ?（對照組）：０．５?ｍｇ／ｍＬ?ＣＬＣ?處理組；５?ｍｇ／ｍＬ?ＣＬＣ?處理組：丨０?ｍｇ／ｍＬ?ＣＬＣ??處理組??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１．?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ＣＬＣ?ｏｎ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｏｒｃｉｎｅ??ｏｏｃｙｔｅｓ?ａｆｔｅｒ?ＧＶ?ｆｒｅｅｚｉｎｇ?ａｎｄ?ｔｈａｗｉｎｇ??表３－１．不同濃度ＣＬＣ對ＧＶ期凍融后的豬卵母細(xì)胞體外成熟影響??Ｔａｂｌｅ?３－１．?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ＣＬＣ?ｏｎ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｏｒｃｉｎｅ?ｏｏｃｙｔｅｓ??ａｆｔｅｒ?ＧＶ?ｆｒｅｅｚｉｎｇ?ａｎｄ?ｔｈａｗｉｎｇ??濃度（ｉｎｇ／ｍＬ）?卵母細(xì)胞數(shù)?成熟卵母細(xì)胞細(xì)胞數(shù)?卵母細(xì)胞成熟率（％）??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?Ｏｏｃｙｔｅｓ?（ｎ）?Ｍａｔｕｒｅ?ｏｏｃｙｔｅ?ｃｅｌｌ?ｎｕｍｂｅｒ?Ｏｏｃｙｔｅ?ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ?ｒａｔｅ??０?３００?１９６?６５．３３?±２．００ｈ??０．５?３００?２０２?６７．３３?±２．６７ｈ??５?３００?２２４?７４．６７?±４．６７ａ??１０?３００?２１５?７１．６７±５．０（）ａｂ??注：同列數(shù)據(jù)進(jìn)行比較

??結(jié)果顯示（如圖３－６）在玻璃化冷凍液中添加濃度為５?ｍｇ／ｍＬ的ＣＬＣ’處理組的??Ｃｌｅａｖｅｄ?Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表達(dá)量顯著低于對照組和其他處理組（尸＜０．０５）。??１?７ｋＤａ?－—Ｃｌｅａｖｅｄ?Ｃａｓｐａｓｅ?３??＾?＼?Ｐ?Ｃ－３?Ｉ?￣￣Ｉ??１２?３?４??圖３－３．四種不同處理組對豬卵母細(xì)胞Ｃｌｅａｖｅｄ?Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表達(dá)量的免疫印跡結(jié)果。??條帶從左到右依次為Ｉ．添加ＣＬＣ濃度為０?ｍｇ／ｍＬ；?２．添加ＣＬＣ濃度為０．５?ｍｇ／ｎｉＬ；?３．添加??ＣＬＣ濃度為５?ｍｇ／ｍＬ；?４．添加ＣＬＣ濃度為１０?ｍｇ／ｍＬ。ＧＡＰＤＨ為內(nèi)參。??Ｆｉｇｕｒｅ?３－３．?Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?Ｃｌｅａｖｅｄ?Ｃａｓｐａｓｅ－３?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ｐｏｒｃｉｎｅ?ｏｏｃｙｔｅｓ??ｔｒｅａｔｅｄ?ｂｙ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｇｒｏｕｐｓ．??１２?Ｃｌｅａｖｅｄ?Ｃａｓｐａｓｅ?－?３??ａ??１?■?＂，?Ｊ?…?ｂ??０．８?－?ｉ??０．６?－??０．４?－??０．２?－??■?■??〇??．?．?．．?．?Ｉ?Ｉ???｜??｜??０ｍｇ／ｍＬ?０．５ｍｇ／ｍＬ?５ｍｇ／ｍＬ?ｌＯｍｇ／ｍＬ??圖３－４．四種不同處理纟Ｕ濟(jì)卵母細(xì)胞Ｃ丨ｅａｖｅｄ?Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋丨＇Ｉ的條帶灰度值。??圖中縱坐標(biāo)代表灰度值

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3418817