豬鏈球菌2型（Streptococcus suis type 2）是一種重要的人畜共患病病原,近年來(lái)對(duì)我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失,然而其致病機(jī)制尚不清楚。在原核生物中,絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（Serine/threonine protein kinases, STPK）和絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶（Serine/threonine phosphatases, STPP）能使特定底物蛋白中絲氨酸或蘇氨酸羥基磷酸化/去磷酸化,催化多種功能蛋白的磷酸化/去磷酸化,從而參與到復(fù)雜的信號(hào)通路中,直接或間接調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄、代謝途徑、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)菌的分裂和毒力和應(yīng)激反應(yīng)中。細(xì)菌的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子（ABC-transporters）系統(tǒng)是細(xì)胞物質(zhì)運(yùn)輸體系的重要組成部分,豬鏈球菌2型的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子與細(xì)菌的生長(zhǎng)和毒力相關(guān),推測(cè)參與STPK蛋白和STPP蛋白調(diào)控系統(tǒng)。另外,細(xì)菌的雙組分系統(tǒng)（Two-component system, TCS）廣泛分布于細(xì)菌中,能夠調(diào)控有機(jī)體基因的表達(dá)來(lái)適應(yīng)外界環(huán)境的變化和刺激,且在調(diào)控細(xì)胞周期、致病性等生理過(guò)程中起重要的作用,推測(cè)參與STPK蛋白和STPP蛋白調(diào)控系統(tǒng)。本課題主要是通... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 絲/蘇氨酸蛋白激酶(STPK)和磷酸酶(STPP)
        1.1.1 STPK和STPP的概況
        1.1.2 真核生物中的STPK和STPP
        1.1.3 原核生物中的STPK和STPP
    1.2 豬鏈球菌2型的雙組份系統(tǒng)
    1.3 豬鏈球菌2型的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子系統(tǒng)
    1.4 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)
        1.4.1 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的意義
        1.4.2 蛋白質(zhì)相互作用研究方法
        1.4.3 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的研究進(jìn)展
        1.4.4 蛋白質(zhì)互作的評(píng)估
2 目的和意義
3 材料方法
    3.1 菌株和質(zhì)粒
    3.2 主要試劑
    3.3 質(zhì)粒構(gòu)建培養(yǎng)基、抗生素配制
    3.4 細(xì)菌雙雜交篩選所需培養(yǎng)基、緩沖液配制
    3.5 引物的設(shè)計(jì)和合成
    3.6 誘餌質(zhì)粒及網(wǎng)絡(luò)蛋白質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.6.1 以SSU05基因組為模板進(jìn)行基因組擴(kuò)增
        3.6.2 PCR產(chǎn)物的純化
        3.6.3 酶切反應(yīng)及酶切產(chǎn)物的回收
        3.6.4 外源片段與載體的連接
        3.6.5 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
        3.6.6 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        3.6.7 質(zhì)粒的小量提取
        3.6.8 質(zhì)粒的酶切鑒定
    3.7 誘餌蛋白質(zhì)粒與靶蛋白質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)化及選擇性培養(yǎng)
        3.7.1 誘餌蛋白質(zhì)粒與靶蛋白質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)化
        3.7.2 誘餌蛋白質(zhì)粒與靶蛋白質(zhì)粒自激活檢測(cè)
        3.7.3 誘餌蛋白質(zhì)粒與靶蛋白質(zhì)粒選擇性培養(yǎng)
    3.8 PCR初步鑒定共轉(zhuǎn)結(jié)果
    3.9 重組質(zhì)粒的構(gòu)建和蛋白的表達(dá)和純化
        3.9.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.9.2 pGEX-KG-PknB在大腸桿菌中表達(dá)和純化
        3.9.3 pET-28c與宿主蛋白融合蛋白的表達(dá)和純化
4 結(jié)果與分析
    4.1 pBT和pTRG載體的分析和改造
    4.2 雙組分文庫(kù)的構(gòu)建
        4.2.1 雙組分文庫(kù)基因的擴(kuò)增
        4.2.2 雙組分文庫(kù)重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    4.3 ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子文庫(kù)的構(gòu)建
        4.3.1 ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子文庫(kù)基因的擴(kuò)增
        4.3.2 ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子文庫(kù)重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    4.4 STPK互作網(wǎng)絡(luò)的研究
        4.4.1 STPK同源性的比較
        4.4.2 STPK誘餌質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.4.3 細(xì)菌雙雜交篩選STPK與雙組分系統(tǒng)的互作
        4.4.4 細(xì)菌雙雜交篩選STPK與ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子的互作
        4.4.5 STPK與雙組分和ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子系統(tǒng)互作的拓?fù)鋱D
        4.4.6 STPK與雙組分系統(tǒng)陽(yáng)性互作蛋白載體的構(gòu)建
        4.4.7 STPK與雙組分系統(tǒng)陽(yáng)性互作蛋白的表達(dá)和純化
    4.5 STPP互作網(wǎng)絡(luò)的研究
        4.5.1 STPP誘餌質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.5.2 細(xì)菌雙雜交篩選STPP與雙組分系統(tǒng)的互作
        4.5.3 細(xì)菌雙雜交篩選STPP與ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子的互作
        4.5.4 STPP與雙組分和ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子系統(tǒng)互作的拓?fù)鋱D
5 討論與結(jié)論
    5.1 討論
    5.2 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附表
致謝



本文編號(hào)：3415030