為研究人/禽流感病毒對細胞的敏感性差異,本研究選取9種常用細胞,分別以10⁵ TCID₅₀的人源甲型流感病毒（IAV）CA04株與禽流感病毒（AIV）Y280株感染不同細胞,檢測不同細胞中流感病毒的增殖水平;利用免疫熒光試驗檢測細胞表面唾液酸（SA）受體類型及其與流感病毒的結合能力;采用流式細胞術定量檢測每種細胞表面的SA類型及含量;通過RT-PCR方法檢測唾液酸轉移酶（ST）（ST3GAL4、ST6GAL1）基因mRNA的轉錄水平。結果顯示,感染CA04株后,MDCK、16HBE、 DF-1和A549檢測到了病毒滴度,但病毒低度較低為:3.2×10² TCID₅₀/0.1 mL～0.95×10¹ TCID₅₀/0.1mL。感染Y280株后,病毒滴度從高到低依次為MDCK、DF-1、Vero、293T、CHO-k1、Hep-2、A549、16HBE和BHK,病毒滴度為6.3×10³ TCID₅₀/0.1 mL～9... 

【文章來源】：中國預防獸醫(yī)學報. 2020,42(10)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

圖1 兩株流感病毒在不同細胞中的復制能力的檢測結果

將9種細胞分別加入FITC標記的植物凝集素SNA和MAA I后，采用流式細胞技術檢測細胞表面被標記的唾液酸受體的熒光強度，并采用Flow Jo V10軟件分析各細胞表面的MFI即SA的含量。結果顯示，SNA標記的DF-1細胞的熒光強度顯著高于其它細胞（p<0.05),MDCK的熒光強度顯著高于293T、Hep-2、A549、16HBE、和BHK(p<0.05）（圖3A),MDCK的熒光強度與CHO-k1、Vero無統(tǒng)計學差異（p>0.05）（圖3A);MAA I標記的各細胞之間的熒光強度差異不顯著（圖3B）。表明9種細胞中MDCK和DF-1細胞表面SAα（2-6)Gal糖鏈結構最為豐富，其結合人流感病毒CA04株的能力較強；而SAα（2-3)Gal糖鏈結構在細胞之間差異不大，其結合AIV Y280株的能力無顯著差異，與2.1的結果基本一致。同時進一步表明，SA糖鏈含量與流感病毒的敏感性呈正相關。圖3 各細胞表面SA的定量檢測結果

各細胞表面SA的定量檢測結果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]HA 226/228雙位點突變對H5N1禽流感病毒受體結合特異性和致病性的影響[J]. 谷春陽,張乾義,孔暉暉,張瑩,姜永萍,關云濤,胡永浩,陳化蘭.  中國預防獸醫(yī)學報. 2014(08)
[2]唾液酸受體并非流感病毒各亞型在雪貂組織中播散分布的決定因子[J]. 占玲俊,鄧巍,鮑琳琳,呂琦,李楓棣,馬春梅,許黎黎,秦川.  中國比較醫(yī)學雜志. 2012(04)



本文編號：3413782