豬捷申病毒（porcine teschovirus,PTV）和豬薩佩羅病毒（porcine sapelovirus,PSV）同屬于小RNA病毒科,分別屬于捷申病毒屬和薩佩羅病毒屬,在豬群中存在廣泛,感染PTV或PSV能導致豬的腹瀉、呼吸道疾病、腦脊髓灰質炎等,甚至死亡。為了解湖南省豬群中PTV和PSV的感染情況以及流行毒株的分子特征,我們建立了分別用于檢測PTV和PSV的RT-PCR方法,應用這兩種方法對其他常見的豬病毒性病原的DNA或cDNA進行PCR擴增均無特異性條帶出現(xiàn),證明其具有強的特異性;PTV-RT-PCR方法最低能夠檢測到36.4 copies/μL的含PTV目的片段的質粒DNA,PSV-RT-PCR方法最低能夠檢測到58.9 copies/μL的含PSV目的片段的質粒DNA,從而證明了這兩種RT-PCR方法的敏感性高。2014年²017年,從湖南省的42個豬場共采集了460份糞便樣品和118份腸道內(nèi)容物樣品,應用PTV-RT-PCR方法對豬群中PTV的感染情況進行調查后發(fā)現(xiàn)豬群感染PTV的總體陽性率達到14.88%,其中在保育階段（16.44%）和... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學湖南省

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

PTV和PSV單重RT-PCR重復性試驗

圖 2-2 PTV和 PSV單重 RT-PCR 特異性試驗Fig. 2-2 Specificity for the simplex PTV/PSV-RT-PCR methods2.3.3 PTV和 PSV單重 RT-PCR敏感性試驗通過 ND2000 超微量核酸蛋白測定儀對含 PTV，PSV 目的片段的重組質粒進行核酸濃度的測定，含 PTV，PSV 目的片段重組質粒的核酸濃度分別是119.8 ng/μL，190.6 ng/μL，應用 PTV 單重 RT-PCR 方法檢測的質粒最高稀釋倍數(shù)為 107，敏感性達到 36.4 copies/μL，而應用 PSV 單重 RT-PCR 方法檢測的質粒最高稀釋倍數(shù)為 107，敏感性達到 58.9 copies/μL（圖 2-3），從而證明建立的這兩種 RT-PCR 方法的敏感性高。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 M

34PTV 毒株之間的進化關系的構建利用 MEGA 6.06 軟件的 Maximum Likelihood 方法，模型選擇為 Poisson +Gamma distributed with Invariant sites (G+I)。通過 bootstrap 值（重復次數(shù) 1000）計算出的與病毒聚簇相關的復制比例在靠近每個樹的分支的位置上展示（僅顯示大于 70%的值）。標尺表示每個位點的氨基酸替換，本研究中鑒定出的 PTV毒株用三角形符號表示。圖 3-1 根據(jù) VP1 基因的氨基酸序列構建的 PTV毒株之間的進化關系Fig. 3-1 Evolutionary PTV relationships based on the deduced amino acid sequences of the VP1 gene.


本文編號：3412710