豬捷申病毒（porcine teschovirus,PTV）和豬薩佩羅病毒（porcine sapelovirus,PSV）同屬于小RNA病毒科,分別屬于捷申病毒屬和薩佩羅病毒屬,在豬群中存在廣泛,感染PTV或PSV能導(dǎo)致豬的腹瀉、呼吸道疾病、腦脊髓灰質(zhì)炎等,甚至死亡。為了解湖南省豬群中PTV和PSV的感染情況以及流行毒株的分子特征,我們建立了分別用于檢測PTV和PSV的RT-PCR方法,應(yīng)用這兩種方法對其他常見的豬病毒性病原的DNA或cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增均無特異性條帶出現(xiàn),證明其具有強的特異性;PTV-RT-PCR方法最低能夠檢測到36.4 copies/μL的含PTV目的片段的質(zhì)粒DNA,PSV-RT-PCR方法最低能夠檢測到58.9 copies/μL的含PSV目的片段的質(zhì)粒DNA,從而證明了這兩種RT-PCR方法的敏感性高。2014年²017年,從湖南省的42個豬場共采集了460份糞便樣品和118份腸道內(nèi)容物樣品,應(yīng)用PTV-RT-PCR方法對豬群中PTV的感染情況進(jìn)行調(diào)查后發(fā)現(xiàn)豬群感染PTV的總體陽性率達(dá)到14.88%,其中在保育階段（16.44%）和... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

PTV和PSV單重RT-PCR重復(fù)性試驗

圖 2-2 PTV和 PSV單重 RT-PCR 特異性試驗Fig. 2-2 Specificity for the simplex PTV/PSV-RT-PCR methods2.3.3 PTV和 PSV單重 RT-PCR敏感性試驗通過 ND2000 超微量核酸蛋白測定儀對含 PTV，PSV 目的片段的重組質(zhì)粒進(jìn)行核酸濃度的測定，含 PTV，PSV 目的片段重組質(zhì)粒的核酸濃度分別是119.8 ng/μL，190.6 ng/μL，應(yīng)用 PTV 單重 RT-PCR 方法檢測的質(zhì)粒最高稀釋倍數(shù)為 107，敏感性達(dá)到 36.4 copies/μL，而應(yīng)用 PSV 單重 RT-PCR 方法檢測的質(zhì)粒最高稀釋倍數(shù)為 107，敏感性達(dá)到 58.9 copies/μL（圖 2-3），從而證明建立的這兩種 RT-PCR 方法的敏感性高。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 M

34PTV 毒株之間的進(jìn)化關(guān)系的構(gòu)建利用 MEGA 6.06 軟件的 Maximum Likelihood 方法，模型選擇為 Poisson +Gamma distributed with Invariant sites (G+I)。通過 bootstrap 值（重復(fù)次數(shù) 1000）計算出的與病毒聚簇相關(guān)的復(fù)制比例在靠近每個樹的分支的位置上展示（僅顯示大于 70%的值）。標(biāo)尺表示每個位點的氨基酸替換，本研究中鑒定出的 PTV毒株用三角形符號表示。圖 3-1 根據(jù) VP1 基因的氨基酸序列構(gòu)建的 PTV毒株之間的進(jìn)化關(guān)系Fig. 3-1 Evolutionary PTV relationships based on the deduced amino acid sequences of the VP1 gene.


本文編號：3412710