sox2是sox家族中研究最多的基因之一,它以單外顯子單拷貝的形式分布在豬（Sus scrofa）的第13號(hào)染色體上,其表達(dá)產(chǎn)物作為轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控下游眾多基因的表達(dá),包括涉及機(jī)體發(fā)育在內(nèi)許多重要的生物學(xué)事件^[1]。它與OCT4、NANOG一同作為核心多能因子,在哺乳動(dòng)物早期胚胎發(fā)育的第一次譜系分化,形成分別具有發(fā)育為胎體和胎盤兩種命運(yùn)的細(xì)胞群體——內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞（Inner cell mass,ICM）和滋養(yǎng)層細(xì)胞（Trophoblast,TE）以及內(nèi)細(xì)胞團(tuán)多能性維持的過(guò)程中便開始發(fā)揮作用^[2]。同時(shí)SOX2也是大多數(shù)種類的多能性干細(xì)胞和癌細(xì)胞的標(biāo)記基因^[3],在干細(xì)胞與再生醫(yī)學(xué)以及癌癥研究領(lǐng)域中是重要的研究對(duì)象^[4]。盡管sox2對(duì)機(jī)體而言具有眾多且十分重要的作用,但是對(duì)于sox2基因上游調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的研究并不像下游功能那樣深入,對(duì)它啟動(dòng)子調(diào)控的系統(tǒng)研究較少,已知結(jié)論有其核心啟動(dòng)元件是位于編碼區(qū)上游468 bp,轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游46 bp處的一個(gè)倒轉(zhuǎn)的“CCAAT box”^[5],這... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

候選報(bào)告質(zhì)粒圖譜

結(jié)果與分析表 3-1 報(bào)告質(zhì)粒對(duì)比Table 3-1 Comparison of reporter plasmids名稱 大小 質(zhì)粒骨架 啟動(dòng)子 報(bào)告基因pEGFP-CMV promoter-T 4,731 bp pEGF-C1 CMV EGFPpEGFP-UBC promoter-T 5,348 bp pEGF-C1 UBC EGFPpEGFP-CMV promoter 3,448 bp pRL-TK CMV EGFPpEGFP-UBC promoter 4,066 bp pRL-TK UBC EGFP將上述構(gòu)建好的四種質(zhì)粒去內(nèi)毒素提取后稀釋到 20ng/μl，分別注射到激活后4h胚胎中，培養(yǎng)、觀察熒光表達(dá)（圖 3-2 B，C，D）。在 4-cell 時(shí)期注射 pEGFP-CMV promoter-T 的組別中少數(shù)胚胎開始能觀察到微弱的熒光，8-cell 時(shí)開始有廣泛的表達(dá)。我們?cè)诠麓坪?5 天對(duì)胚胎進(jìn)行了熒光鏡檢與統(tǒng)計(jì)。結(jié)果只有 pEGFP-CMV promoter-T 質(zhì)粒注射組有較好的 EGFP 表達(dá)。在后續(xù)我們對(duì) pEGFP-CMV promoter-T 注射組額外添加了濃度 100ng/μl 的注射組。其余結(jié)果與上次相同，但提高濃度后陽(yáng)性率與熒光強(qiáng)度均有提高（圖 3-2 B，D）。在發(fā)育率方面，注射對(duì)胚胎發(fā)育有較大影響，相較孤雌對(duì)照組，囊胚率下降顯著，卵裂后發(fā)育主要阻滯在 4,8-cell 階段（圖 3-2 C）。因此在后續(xù)試驗(yàn)中將以 pEGFP-CMV promoter-T 質(zhì)粒為基本骨架，質(zhì)�？倽舛仍O(shè)置為 100ng/μl。

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文（+0h），孤雌后 2 小時(shí)胚胎（+2h），孤雌后 4 小時(shí)胚胎（+4h），孤雌后 6 小和孤雌后 8 小時(shí)胚胎（+8h），孤雌后 10 小時(shí)胚胎（+10h），孤雌后 11 小時(shí)胚養(yǎng)并跟蹤熒光表達(dá)情況（圖 3-3）。與之前的結(jié)果類似，4-cell 時(shí)期開始能監(jiān)測(cè)在 8-cell 時(shí)廣泛表達(dá)。我們?cè)诠麓坪?6 天胚胎進(jìn)行了熒光鏡檢與統(tǒng)計(jì)（圖 3-3示，注射時(shí)間對(duì)胚胎發(fā)育和 EGFP 表達(dá)有較大影響。卵裂后的胚胎發(fā)育主要阻階 段 （ 圖 3-3 C ）， 綜 合 后 認(rèn) 為 在 +2h 到 +6h 之 間 是 較 為 合 適 的


本文編號(hào)：3412553