對(duì)轉(zhuǎn)基因克隆牛乳脂肪球膜蛋白質(zhì)及四種牛奶蛋白質(zhì)組學(xué)研究
發(fā)布時(shí)間：2021-09-23 19:19
作為牛奶中蛋白質(zhì)的重要組成部分乳脂肪球膜蛋白質(zhì)具有多種重要的生理功能,由于其來(lái)源于乳腺上皮細(xì)胞膜及內(nèi)質(zhì)網(wǎng),對(duì)其研究不僅是對(duì)轉(zhuǎn)基因克隆牛奶蛋白質(zhì)安全性評(píng)估的重要組成,而且可以從側(cè)面反映產(chǎn)奶牛本身乳腺的健康狀況。圍繞不同奶牛品種或品系（包括美國(guó)荷斯坦牛、中國(guó)荷斯坦牛、娟珊牛及水牛）乳品性狀的差異,建立牛乳清蛋白差異表達(dá)譜、乳脂肪球膜差異蛋白質(zhì)表達(dá)譜,挖掘與乳品質(zhì)改良相關(guān)的功能性蛋白,揭示不同奶牛品種乳蛋白質(zhì)合成、分泌信號(hào)傳導(dǎo)通路的差異,為牛奶品質(zhì)的改良提供素材,同時(shí)通過牛奶蛋白質(zhì)組技術(shù)平臺(tái)和牛奶蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)的建立,進(jìn)行轉(zhuǎn)基因牛奶蛋白質(zhì)表達(dá)差異的食品安全研究。在本論文中,我們分別對(duì)在乳腺中特異表達(dá)人溶菌酶（TC-LZ）、人α-乳清蛋白（TC-LA）和人乳鐵蛋白（TC-LF）的三個(gè)轉(zhuǎn)基因克隆牛品系共17頭健康的轉(zhuǎn)基因克隆牛、3頭健康的克隆牛和9頭健康的普通對(duì)照牛的初乳和常乳的乳脂肪球膜蛋白質(zhì)進(jìn)行了全面系統(tǒng)的分析。利用液質(zhì)聯(lián)用對(duì)各組中初乳和常乳乳脂肪球膜蛋白質(zhì)表達(dá)譜進(jìn)行了鑒定和分析。我們?cè)谖褰M樣品中共鑒定到蛋白質(zhì)1225種,在TC-LA組中有166種特異表達(dá)的蛋白質(zhì),在TC-LF組中有265種特...
【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：116 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
轉(zhuǎn)基因克隆組蛋白表達(dá)譜中特異表達(dá)蛋白功能的富集結(jié)果
2.3.2利用2D-PAGE對(duì)轉(zhuǎn)基因克隆MFGM蛋白質(zhì)的鑒定利！^^雙向電泳的方法，我們對(duì)三組轉(zhuǎn)基因克隆MFGM蛋內(nèi)質(zhì)、一組克隆牛MFGM蛋內(nèi)質(zhì)、一組齊通牛MFGM蛋內(nèi)質(zhì)初乳及常乳的樣品進(jìn)行了鑒定。由丁-人姓的MFGM蛋白質(zhì)屬丁?跨膜型大分子量蛋白質(zhì)，并且大量蛋白質(zhì)高度糖基化，利用齊通考馬斯亮藍(lán)染色無(wú)法將所存的蛋白質(zhì)著色，閃此我們采)與質(zhì)譜兼容的銀染能夠更好的顯示山大W的低豐度蛋白質(zhì)。與考馬斯亮藍(lán)染色乳清蛋白質(zhì)相比，銀染的MFGM蛋白膠圖顯示出了更多的蛋ft質(zhì)，組成可以明顯的看出與乳清蛋A組成的差異（圖2-3)，可以看出采用氯仿/甲醇沉淀的方法可以有效的收集到MFGM蛋內(nèi)質(zhì)。在利用2D-電泳結(jié)合高靈敏度銀染的方法，獲得了蛋內(nèi)質(zhì)差異譜與LC-MS/MS的結(jié)果相比，一些差異點(diǎn)并沒有在銀染膠圖上表現(xiàn)出來(lái)，說明在這些差異點(diǎn)的蛋白質(zhì)濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低丁?銀染的鑒定線，屬丁-極低豐度蛋白質(zhì)。利用圖像分析軟件對(duì)各個(gè)牛MFGM組內(nèi)初乳和常乳差異表的蛋白質(zhì)進(jìn)行搜尋，并利MALDl-TOF-MS的方法進(jìn)行鑒定（圖2-4)。除了兒種抗體之外，我們還發(fā)現(xiàn)了 33種蛋白質(zhì)在初乳中的表達(dá)呈要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高丁?常乳MFGM。通過對(duì)其功能的研究，去除一些未知功能的蛋內(nèi)質(zhì)，人量的蛋白質(zhì)都與免疫相關(guān)，這些蛋內(nèi)質(zhì)在新生兒獲得性免疫方面具有重耍的作HJ。
利用圖像分析軟件對(duì)各個(gè)牛MFGM組內(nèi)初乳和常乳差異表的蛋白質(zhì)進(jìn)行搜尋，并利MALDl-TOF-MS的方法進(jìn)行鑒定（圖2-4)。除了兒種抗體之外，我們還發(fā)現(xiàn)了 33種蛋白質(zhì)在初乳中的表達(dá)呈要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高丁?常乳MFGM。通過對(duì)其功能的研究，去除一些未知功能的蛋內(nèi)質(zhì)，人量的蛋白質(zhì)都與免疫相關(guān)，這些蛋內(nèi)質(zhì)在新生兒獲得性免疫方面具有重耍的作HJ。圖2-3銀染MFGM蛋白質(zhì)膠圖（左）與考馬斯亮藍(lán)染色乳清蛋白質(zhì)膠圖（右）比較。Figure 2-3 comparison gel from MFGM proteinsof silver stain (left) and from milk whey proteinsof coomassiebrilliant blue staining (right).44
本文編號(hào)：3406267
【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：116 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
轉(zhuǎn)基因克隆組蛋白表達(dá)譜中特異表達(dá)蛋白功能的富集結(jié)果
2.3.2利用2D-PAGE對(duì)轉(zhuǎn)基因克隆MFGM蛋白質(zhì)的鑒定利！^^雙向電泳的方法，我們對(duì)三組轉(zhuǎn)基因克隆MFGM蛋內(nèi)質(zhì)、一組克隆牛MFGM蛋內(nèi)質(zhì)、一組齊通牛MFGM蛋內(nèi)質(zhì)初乳及常乳的樣品進(jìn)行了鑒定。由丁-人姓的MFGM蛋白質(zhì)屬丁?跨膜型大分子量蛋白質(zhì)，并且大量蛋白質(zhì)高度糖基化，利用齊通考馬斯亮藍(lán)染色無(wú)法將所存的蛋白質(zhì)著色，閃此我們采)與質(zhì)譜兼容的銀染能夠更好的顯示山大W的低豐度蛋白質(zhì)。與考馬斯亮藍(lán)染色乳清蛋白質(zhì)相比，銀染的MFGM蛋白膠圖顯示出了更多的蛋ft質(zhì)，組成可以明顯的看出與乳清蛋A組成的差異（圖2-3)，可以看出采用氯仿/甲醇沉淀的方法可以有效的收集到MFGM蛋內(nèi)質(zhì)。在利用2D-電泳結(jié)合高靈敏度銀染的方法，獲得了蛋內(nèi)質(zhì)差異譜與LC-MS/MS的結(jié)果相比，一些差異點(diǎn)并沒有在銀染膠圖上表現(xiàn)出來(lái)，說明在這些差異點(diǎn)的蛋白質(zhì)濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低丁?銀染的鑒定線，屬丁-極低豐度蛋白質(zhì)。利用圖像分析軟件對(duì)各個(gè)牛MFGM組內(nèi)初乳和常乳差異表的蛋白質(zhì)進(jìn)行搜尋，并利MALDl-TOF-MS的方法進(jìn)行鑒定（圖2-4)。除了兒種抗體之外，我們還發(fā)現(xiàn)了 33種蛋白質(zhì)在初乳中的表達(dá)呈要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高丁?常乳MFGM。通過對(duì)其功能的研究，去除一些未知功能的蛋內(nèi)質(zhì)，人量的蛋白質(zhì)都與免疫相關(guān)，這些蛋內(nèi)質(zhì)在新生兒獲得性免疫方面具有重耍的作HJ。
利用圖像分析軟件對(duì)各個(gè)牛MFGM組內(nèi)初乳和常乳差異表的蛋白質(zhì)進(jìn)行搜尋，并利MALDl-TOF-MS的方法進(jìn)行鑒定（圖2-4)。除了兒種抗體之外，我們還發(fā)現(xiàn)了 33種蛋白質(zhì)在初乳中的表達(dá)呈要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高丁?常乳MFGM。通過對(duì)其功能的研究，去除一些未知功能的蛋內(nèi)質(zhì)，人量的蛋白質(zhì)都與免疫相關(guān)，這些蛋內(nèi)質(zhì)在新生兒獲得性免疫方面具有重耍的作HJ。圖2-3銀染MFGM蛋白質(zhì)膠圖（左）與考馬斯亮藍(lán)染色乳清蛋白質(zhì)膠圖（右）比較。Figure 2-3 comparison gel from MFGM proteinsof silver stain (left) and from milk whey proteinsof coomassiebrilliant blue staining (right).44
本文編號(hào)：3406267
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