犬瘟熱（Canine distemper,CD）是由犬瘟熱病毒（Canine distemper virus,CDV）引起的一種多種屬動(dòng)物共患傳染病,因其引起感染動(dòng)物發(fā)病率高和死亡率高被人們所重視。CD臨床癥狀多樣,可以引起發(fā)熱、結(jié)膜炎、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀等,病程中后期可因細(xì)菌引起繼發(fā)感染。傳統(tǒng)宿主包括犬科、鼬科、浣熊科和貓科等。近年來(lái),CD在世界范圍內(nèi)暴發(fā),特別是CD的跨宿主傳播引起了人們的重視。作為CDV受體識(shí)別蛋白的H蛋白是病毒變異最頻繁的蛋白,H蛋白變異導(dǎo)致的抗原漂移可能是CD高發(fā)的原因。研究顯示,CDV H基因的變異導(dǎo)致病毒適應(yīng)了新宿主獼猴,有可能突破宿主屏障通過(guò)SLAM受體傳播給人類,這可能對(duì)當(dāng)今人類公共衛(wèi)生安全構(gòu)成威脅。本研究通過(guò)表達(dá)綠色熒光蛋白（eGFP）的重組CDV 5804Pe株在表達(dá)人SLAM受體的Vero細(xì)胞（Vero-hSLAM,VHS）上連續(xù)傳代,最終獲得能快速適應(yīng)人SLAM受體的毒株。病毒H基因測(cè)序表明,CDV適應(yīng)人SLAM受體H基因第540位氨基酸發(fā)生改變,即由天冬氨酸（D）突變?yōu)楦拾彼幔℅）。通過(guò)構(gòu)建突變體的真核表達(dá)載體和細(xì)胞融合試驗(yàn)證實(shí),僅需一個(gè)氨基酸的改... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 犬瘟熱病毒研究進(jìn)展
    1.1 犬瘟熱病毒基因組
        1.1.1 核衣殼蛋白(Nucleocapsid protein N)
        1.1.2 磷蛋白(Phospho protein P)
        1.1.3 基質(zhì)蛋白(Matrix protein M)
        1.1.4 大蛋白(Large polymerase protein L)
        1.1.5 融合蛋白(Fusion protein F)
        1.1.6 附著蛋白或血凝素蛋白(Hemagglutinin protein H)
    1.2 CDV的變異與跨宿主傳播
    1.3 犬瘟熱的臨床癥狀和病理變化
    1.4 犬瘟熱的流行病學(xué)
    1.5 犬瘟熱疫苗的研究現(xiàn)狀
        1.5.1 滅活疫苗
        1.5.2 弱毒活疫苗
        1.5.3 亞單位疫苗
        1.5.4 DNA疫苗
    1.6 研究的目的及意義
第二章 犬瘟熱病毒適應(yīng)人SLAM受體的研究
    2.1 材料
        2.1.1 病毒和細(xì)胞
        2.1.2 載體與菌種
        2.1.3 工具酶與主要試劑
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 CDV5804Pe-VHS適應(yīng)株的獲得
        2.2.2 CDV5804Pe-VHS適應(yīng)株H基因RBS區(qū)分析
        2.2.3 H基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.4 H/F質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染
        2.2.5 CDV5804Pe-VHS適應(yīng)株全基因組測(cè)序
    2.3 結(jié)果及分析
        2.3.1 CDV5804Pe株感染Vero-hSLAM細(xì)胞
        2.3.2 CDV5804Pe株和5804Pe-VHS株對(duì)不同易感細(xì)胞的感染能力
        2.3.3 5804 Pe-VHS H基因RBS區(qū)測(cè)序比對(duì)
        2.3.4 H和 F基因PCR擴(kuò)增
        2.3.5 H和 F基因重組質(zhì)粒鑒定
        2.3.6 細(xì)胞融合
        2.3.7 5804 Pe-VHS全基因組RT-PCR電泳結(jié)果
        2.3.8 陽(yáng)性重組克隆PCR鑒定結(jié)果
        2.3.9 全基因組序列分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 犬瘟熱滅活疫苗制備與免疫效果評(píng)價(jià)
    3.1 材料和方法
        3.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與病毒
        3.1.2 試驗(yàn)材料
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
        3.1.4 滅活疫苗的制備
        3.1.5 比格犬免疫
        3.1.6 動(dòng)物攻毒與病料采集
        3.1.7 中和抗體的測(cè)定
        3.1.8 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)
        3.1.9 病料處理及病理學(xué)觀察
        3.1.10 病毒RNA的提取和c DNA的合成
        3.1.11 熒光定量PCR測(cè)定病毒RNA載量
        3.1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.2 結(jié)果及分析
        3.2.1 CDV攻毒后臨床癥狀
        3.2.2 CDV攻毒后病理變化
        3.2.3 CDV外周血淋巴細(xì)胞數(shù)
        3.2.4 CDV中和抗體的測(cè)定
        3.2.5 眼鼻拭子和直腸拭子中CDV RNA含量
        3.2.6 組織臟器中CDV RNA含量
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]犬瘟熱病毒敏感細(xì)胞系和感染性克隆的構(gòu)建與初步應(yīng)用研究[D]. 劉玉秀.吉林大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3403403