發(fā)布時間：2021-09-22 06:52

　　RAD18是一種與單鏈DNA結(jié)合的RING結(jié)構(gòu)蛋白,具有泛素E3連接酶作用。RAD18基因在DNA損傷修復(fù)中具有多方面的功能[1],同時在蛋白降解[2]、基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中也起作用[3]。目前有關(guān)RAD18基因的DNA損傷修復(fù)功能研究主要集中在體細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞上,對其在動物胚胎發(fā)育過程中是否也具有相同的作用尚不清楚。為此,本研究首先建立了以H202為DNA損傷誘導(dǎo)劑的小鼠胚胎DNA損傷模型,而后采用RNA干擾技術(shù),將RAD18基因shRNA病毒顆粒注入到小鼠受精卵中,通過qRT-PCR及免疫熒光技術(shù)分析小鼠早期胚胎中RAD18基因及DNA雙鏈斷裂（DSB）指標(biāo)（γH2AX和ρATM）的表達(dá)變化,初步探索RAD18基因在小鼠早期胚胎DNA損傷修復(fù)中的作用。研究結(jié)果可為闡明胚胎DNA氧化損傷修復(fù)機(jī)制及提高體外培養(yǎng)胚胎質(zhì)量奠定基礎(chǔ)。1.RAD18基因在小鼠早期胚胎中的表達(dá)及小鼠胚胎DNA損傷模型的建立為了研究RAD18基因在小鼠早期胚胎DNA損傷修復(fù)中的作用,本實(shí)驗(yàn)首先采用qRT-PCR及免疫熒光方法分析了RAD18基因在小鼠早期胚胎發(fā)育過程中的表達(dá)規(guī)律。而后以H202作為DNA損傷誘導(dǎo)劑,觀察... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

-1DSB識別和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的示意圖

圖3-2 RAD18蛋白在小鼠早期胚胎中的表達(dá)Figure 3-2 Expression of RAD 18 protein in mouse early embryos.2.2小鼠早期胚胎DNA損傷模型建立.1 H2O2對小鼠早期胚胎發(fā)育的影響以KOSM和KOSM (-)為對照組，以H2O2為DNA損傷誘導(dǎo)劑，觀察不同對小鼠胚胎發(fā)育的影響。結(jié)果顯示，與KOSM對照組相比，KOSM (-)組率下降，無顯著差異（/>>0.05)，囊胚率顯著下降（P<0.05)。與K相比，隨著H2O2濃度的增加，小鼠胚胎的分裂率和囊胚率都呈下.降趨02濃度開始，小鼠胚胎的分裂率和囊胚率均顯著低下降（尸<0.05) ； 2兩組間胚胎的分裂率和囊胚率無顯著差異，2.4 |iM H2O2處理的胚胎不期。以上結(jié)果說明1.5?2.4^1^1吐02對小鼠早期胚胎發(fā)育均有影響（表3-

其中2.4 ^iM組兩個時期胚胎的YH2AX焦點(diǎn)數(shù)多于2.1 |aM組同時期的胚胎，說明2.1 |iM和2.4 HMH2O2可誘導(dǎo)小鼠胚胎產(chǎn)生明顯的DSB現(xiàn)象（圖3-5A、圖3-5B)，后續(xù)試驗(yàn)主要觀察2.1 ^lM和2.4 H2O2處理對胚胎發(fā)育及DNA氧化耐受能力的影響。.YH2AX pATM■■■■。。一 ■■ ■。�！皌r。12 ■■ ■圖3-5A陰性對照組胚胎YH2AX利pATM的表達(dá)Figure 3-5A The expression of yHZAX and pATM in embryos of negative controls28

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[3]組蛋白H3S10磷酸化在動物卵母細(xì)胞成熟及核移植胚胎發(fā)育過程中的作用研究[D]. 田明明.廣西大學(xué) 2013
[4]水牛CD14基因shRNA片段的篩選及其對相關(guān)基因表達(dá)的影響研究[D]. 李美青.廣西大學(xué) 2012
[5]氧化應(yīng)激性DNA損傷精子受精后受精卵修復(fù)與沒食子兒茶素沒食子酸酯（）抗氧化保護(hù)作用的研究[D]. 陳曼.汕頭大學(xué) 2011
[6]UV介導(dǎo)的細(xì)胞DNA損傷及損傷后修復(fù)的初步研究[D]. 劉淼.陜西師范大學(xué) 2006
[7]過氧化氫（H2O2）對小鼠1—細(xì)胞期胚胎體外發(fā)育的影響[D]. 韓榮勛.延邊大學(xué) 2005
[8]小鼠早期轉(zhuǎn)基因胚胎體外培養(yǎng)與鑒定的研究[D]. 趙永貞.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2004



本文編號：3403336