益生菌和中藥提取物對(duì)機(jī)體均有良好的保健作用,能否保持各自的優(yōu)點(diǎn)聯(lián)合應(yīng)用,對(duì)藥品研發(fā)具有深遠(yuǎn)的指導(dǎo)意義。本研究通過對(duì)比試驗(yàn)選擇適合的益生菌,采用檢測(cè)表型特征的常規(guī)方法結(jié)合現(xiàn)代分子生物學(xué)PCR方法鑒定益生菌,用溶血性實(shí)驗(yàn)及小鼠致病性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)益生菌的安全性,根據(jù)多糖含量變化、細(xì)菌生長(zhǎng)曲線與活菌數(shù)計(jì)數(shù)方法觀察益生菌與中藥提取物共培養(yǎng)的相互影響,采用抑菌試驗(yàn)研究益生菌與中藥提取物共培養(yǎng)對(duì)致病菌的作用,試驗(yàn)結(jié)果如下:試驗(yàn)一、3種益生菌的對(duì)比篩選試驗(yàn)。將益生菌（30億cfu/mL）按0.1mL/10g小鼠體重進(jìn)行灌胃。結(jié)果,各試驗(yàn)組的小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)差異不顯著（P>0.05）。混合菌組鼠在試驗(yàn)第7天增重率為0.72±0.04g/d增重顯著高于對(duì)照組（P<0.05）,第14天丁酸梭菌組的增重率為1.57±0.05g/天增重顯著高于對(duì)照組（P≤0.05）。在植物乳桿菌組和混合菌組三個(gè)階段內(nèi)均出現(xiàn)小鼠剖檢異常。試驗(yàn)二、LYD芽孢桿菌的鑒定與抵抗力試驗(yàn)。采用傳統(tǒng)方法及分子生物學(xué)方法鑒定LYD芽孢桿菌為地衣芽孢桿菌。11種防腐消毒藥耐受力試驗(yàn),結(jié)果2%氫氧化鈉、3%雙氧水對(duì)地衣芽孢桿菌有殺滅... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１?ＬＹＤ芽孢桿菌菌落?

３．２．４結(jié)果與分析??３．２．４．１形態(tài)學(xué)鑒定??ＬＹＤ芽孢桿菌菌株在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)１２ｈ后，形態(tài)如圖３－１，３－２所示，菌落??呈白色、扁平、表面粗糙褶皺、邊緣不整齊的地衣狀。挑取菌落進(jìn)行革蘭氏染色，如??圖所示，菌體為藍(lán)紫色、桿狀、單個(gè)或成對(duì)、短鏈、革蘭氏陽(yáng)性桿菌。??．Ｗ?二．??圖３－１?ＬＹＤ芽孢桿菌菌落?圖３－２?ＬＹＤ芽孢桿菌革蘭氏染色??Ｆｉｇ．?３－１?ＬＹＤ?ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｓｕｂｔｉｌｉｓ．?Ｆｉｇ．?３－２?ＬＹＤ?Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｇｒａｍｍｅ?ｓｔａｉｎ．??３．２．４．２生理生化鑒定??ＬＹＤ芽孢桿菌的生理生化試驗(yàn)和對(duì)不同碳源的發(fā)酵利用情況試驗(yàn)結(jié)果如圖３－３、??３￣４、３－５和表３－１所示，對(duì)照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》進(jìn)行判斷，鑒定結(jié)果為地衣芽??孢桿菌屬。??表３－１?ＬＹＤ芽孢桿菌的生化試驗(yàn)??Ｔａｂｌｅ?３－１?ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｔｅｓｔ?ｏｆ?Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ＬＹＤ???項(xiàng)目名稱?＾???厭氧生長(zhǎng)?＋??Ｖ－Ｐ測(cè)定?＋??淀粉水解試驗(yàn)?＋??明膠液化試驗(yàn)?＋??Ｄ－甘露醇?＋??枸櫞酸?＋???一內(nèi)酸鹽?＋???注：＋表示陽(yáng)性結(jié)果，－表示陰性結(jié)果??２０??

畚牡匾卵浚嘲?司??現(xiàn)忻縑崛∥鎘τ玫某醪窖芯浚崳?＃．?ｒｉ?場(chǎng)??圖３－３?ＬＹＤ芽孢桿菌菌落?圖３－４?ＬＹＤ芽孢桿菌淀粉水解圖３－５?ＬＹＤ芽孢桿菌生化鑒定??ＦＩＧ３－３?ＬＹＤ?ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｓｕｂｔｉｌｉｓ．?試驗(yàn)?ＦＩＧ３－５?ＬＹＤ?Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ??ＦＩＧ?３－４?．ＬＹＤ?ｔｅｓｔ?ｏｆ?ｓｔａｒｃｈ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｂａｃｉｌｌｕｓ??ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ?ｏｆ?Ｂａｃｉｌｌｕｓ??３．２．４．２?１６Ｓ?ｒＤＮＡ基因序列同源性分析??以地衣芽孢桿菌的ＤＮＡ為模板，１６Ｓ?ｒＤＮＡ通用引物進(jìn)行擴(kuò)增后得到約ｌＯＯＯｂｐ??的特異性擴(kuò)增產(chǎn)物如圖所示，產(chǎn)物送康維生物科技有限公司測(cè)序。??將地衣芽孢桿菌的１６Ｓ?ｒＤＮＡ的ＰＣＲ克隆進(jìn)行測(cè)序，獲得長(zhǎng)度為１０１５ｂｐ的１６Ｓ??ｒＤＮＡ序列，和ＰＣＲ電泳結(jié)果一致如圖３－８。測(cè)序結(jié)果見附錄１。??將測(cè)序結(jié)果在ＮＣＢＩ數(shù)據(jù)庫(kù)與其他細(xì)菌進(jìn)行１６ＳｒＤＮＡ序列進(jìn)行對(duì)比，找出同源性??較高的３株菌株，ＭｅｇＡｌｉｇｎ構(gòu)建矩形圖和系統(tǒng)進(jìn)化樹，如圖３－６、３－７。經(jīng)同源性對(duì)比，??試驗(yàn)菌株于地衣芽孢桿菌同源性達(dá)９７．８％，屬于芽孢桿菌屬地衣芽孢桿菌種。???Ｐｅｒｃｅｎｔ?Ｉｄｅｎｔｉｔｙ???Ｍ?１?Ｉ?２?Ｉ?３?Ｉ?４????Ｉ〇＞?１?ｍ?９７．８?９７．８?９７．６?１?ＮＲ＿Ｂａｄｌｌｕｓ??｜?＇?ＨＵ?ｌｌｌｌ丨丨丨丨丨?Ｉ?２?ＮＲ＿１１８９９６．１??｜?３?２．２?０．０?ｌ?３?ＮＲ＿１１６０２３．１??〇?４?


本文編號(hào)：3403244