為了探究lncRNA對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞（MSCs）增殖及成肌分化的影響,試驗(yàn)選擇前期通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)獲得的一個(gè)牛MSCs分化前后表達(dá)差異的lnc0803基因,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)驗(yàn)證測(cè)序獲得的牛MSCs分化前后表達(dá)差異倍數(shù);Ensembl數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)分析lnc0803基因的生物信息學(xué)特征;以及通過(guò)細(xì)胞核質(zhì)分離試驗(yàn)后的實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)lnc0803基因進(jìn)行亞細(xì)胞定位;并設(shè)計(jì)合成lnc0803基因的干擾RNA（siRNA）,篩選有效的siRNA轉(zhuǎn)染牛MSCs,采用EdU染色方法檢測(cè)干擾lnc0803基因?qū)εSCs增殖的影響;進(jìn)一步對(duì)牛MSCs進(jìn)行體外成肌誘導(dǎo)分化,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western-blot分別檢測(cè)分化標(biāo)志因子肌細(xì)胞生成素（MyoG）和肌球蛋白重鏈（MyHC）的基因及蛋白表達(dá)水平,從而綜合分析干擾lnc0803基因?qū)εSCs成肌分化的影響。結(jié)果表明:誘導(dǎo)分化后的牛MSCs中l(wèi)nc0803基因的表達(dá)量比增殖期高2.26倍;lnc0803基因由�；蚪M的28號(hào)染色體轉(zhuǎn)錄而來(lái),是一條不具有蛋白編碼能力的長(zhǎng)鏈非編碼RNA,在牛MSCs的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)... 

【文章來(lái)源】：黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020,(07)北大核心

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牛MSCs分化前后lnc0803基因表達(dá)量的檢測(cè)結(jié)果

為了探究lnc0803基因表達(dá)變化對(duì)牛MSCs發(fā)育是否具有調(diào)控作用,針對(duì)lnc0803基因序列設(shè)計(jì)合成3條siRNA,即si-1、si-2、si-3,同時(shí)以設(shè)計(jì)合成的無(wú)效干擾序列為對(duì)照,將其轉(zhuǎn)染至牛MSCs中,并對(duì)MSCs進(jìn)行成肌誘導(dǎo)分化,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)lnc0803基因在增殖期和成肌誘導(dǎo)分化72小時(shí)時(shí)的表達(dá)量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在增殖期si-2對(duì)lnc0803基因的干擾更加徹底,在分化期仍然能有效干擾lnc0803基因,因此選擇si-2對(duì)lnc0803基因進(jìn)行干擾,結(jié)果見(jiàn)圖4。表2 CPC網(wǎng)站預(yù)測(cè)結(jié)果Table 2 Prediction results of CPC website 基因名稱 編碼能力 蛋白編碼能力評(píng)分 MEG9 非編碼Noncoding (weak) -0.808 597 lnc0803 非編碼Noncoding (weak) -1.191 400 HPRT1 編碼Coding 2.305 820

表2 CPC網(wǎng)站預(yù)測(cè)結(jié)果Table 2 Prediction results of CPC website 基因名稱 編碼能力 蛋白編碼能力評(píng)分 MEG9 非編碼Noncoding (weak) -0.808 597 lnc0803 非編碼Noncoding (weak) -1.191 400 HPRT1 編碼Coding 2.305 820圖4 牛MSCs lnc0803基因干擾模型的構(gòu)建結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]干擾lnc4351對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖與成肌分化的影響[J]. 張俊星,朱菲菲,李燕,陳明明,劉新峰,郭宏,丁向彬.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2019(03)
[2]成肌分化抗原相關(guān)長(zhǎng)鏈非編碼RNA對(duì)肌生成過(guò)程作用的研究進(jìn)展[J]. 張曉娟,李佳軒,劉新峰,張林林,丁向彬,郭宏,李新.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2018(21)
[3]LncRNA調(diào)控骨骼肌發(fā)育的分子機(jī)制及其在家養(yǎng)動(dòng)物中的研究進(jìn)展[J]. 周瑞,王以鑫,龍科任,蔣岸岸,金龍.  遺傳. 2018(04)
[4]lncRNA-HZ5對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞成肌分化的調(diào)控作用研究[J]. 丁向彬,張蔚然,張俊星,王軼敏,劉新峰,郭宏.  天津農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào). 2017(03)
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[6]牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的分離鑒定和誘導(dǎo)分化[J]. 王軼敏,代陽(yáng),劉新峰,劉中偉,李吉霞,郭宏,丁向彬.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2014(07)



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