為建立檢測牛傳染性鼻氣管炎病毒（IBRV）血清抗體的阻斷ELISA方法,本研究以經蔗糖密度梯度離心法純化的IBRV作為免疫原制備1株單克隆抗體（MAb）,命名為cp-1-1。經間接ELISA、IFA和western blot鑒定,該MAb與IBRV呈陽性反應,與牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）及牛副流感病毒3型（BPIV3）呈陰性反應,具有較強的特異性。質譜分析結果顯示MAb cp-1-1識別的表位位于IBRV VP8蛋白。以純化的IBRV作為包被抗原、MAb cp-1-1作為檢測抗體,建立檢測IBRV血清抗體的阻斷ELISA方法。該檢測方法的抗原包被量為0.89μg/孔,樣品稀釋度為12,檢測抗體MAb量為1.3μg/孔,二抗稀釋度為15 000。利用50份IBRV抗體呈弱陽性的牛血清（中和抗體效價為14～116）作為標準參考血清,確定該檢測方法的阻斷率Cut Off值為52.06%,即阻斷率高于52.06%時判為陽性,低于52.06%時判為陰性。阻斷ELISA方法特異性試驗顯示僅IBRV陽性血清檢測為陽性,而BVDV、BPIV3、牛腺病毒3型（BADV-3）和O型口蹄疫病毒（O-FMD... 

【文章來源】：中國預防獸醫(yī)學報. 2020,42(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

MAb與IBRV反應的westernblot分析Fig.2WesternblotanalysisofthereactionoftheMAbcp-1-170kuM:ProteinMarker；1:cp-1-1

50份弱陽性樣品結果正態(tài)分布圖Fig.350weakpositivesamplesnormaldistributiondiagram0.260.280.300.320.340.360.380.400.42OD450nmvalue0

特異性試驗結果Fig.4SpecifictestresultsNegativecontrolIBRVBVDVBPIV3BADV3FMDV/OOD450nmvalue0Inhibitionrate

【參考文獻】：
碩士論文
[1]牛傳染性鼻氣管炎病毒單克隆抗體的制備及部分單克隆抗體抗原表位的鑒定[D]. 楊婷.中國農業(yè)科學院 2017



本文編號：3398423