血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）被發(fā)現(xiàn)以來,其病理生理功能,特別是作為SARS、COVID-19等冠狀病毒侵入細(xì)胞的功能性受體,顯示了巨大的潛能,明確其在不同物種的基因序列及結(jié)構(gòu)可為冠狀病毒感染機(jī)制研究提供依據(jù)。本研究以中國麻鴨為研究對象,利用RT-PCR和Western blot檢測ACE2在中國麻鴨各組織中的表達(dá),然后用PCR技術(shù),擴(kuò)增出中國麻鴨ACE2基因的完整ORF序列,再TA克隆至pMD-19T載體中進(jìn)行測序,對所得序列進(jìn)行生物信息學(xué)解析。結(jié)果證實,ACE2在中國麻鴨心、肝、肺、腎等組織中均有表達(dá)�；蚩寺〗Y(jié)果顯示,該中國麻鴨ACE2基因的CDS序列全長為2 435 bp,編碼805個氨基酸殘基,與人ACE2核苷酸序列和氨基酸序列同源性分別為66.2%和66.4%,且處在不同進(jìn)化樹分支上。通過對與SARS病毒S蛋白結(jié)合有關(guān)的18個關(guān)鍵氨基酸殘基分析發(fā)現(xiàn),中國麻鴨除第330和353位氨基酸外,其余均與人不相同。結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),中國麻鴨ACE2為Ⅰ型跨膜蛋白,有多處N-糖基化位點。研究首次獲得中國麻鴨ACE2基因的完整ORF序列及相關(guān)基礎(chǔ)資料,所得序列已上傳GenBank并被成功收錄... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2020,51(07)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

中國麻鴨ACE2基因CDS區(qū)和編碼氨基酸序列

采用RT-PCR檢測ACE2基因在中國麻鴨體內(nèi)各組織的分布,檢測結(jié)果如圖1A。由圖1A可知,在中國麻鴨心、肝、肺、腎組織中均有ACE2基因的單一條帶(泳道1、2、3、4),條帶大小為395 bp左右,與預(yù)期(395 bp)一致。取檢測到ACE2基因分布的心、肝、肺、腎組織進(jìn)行Western blot,由試驗結(jié)果(圖1B)可知,在這些組織中有ACE2蛋白表達(dá),說明ACE2在中國麻鴨體內(nèi)存在并有蛋白表達(dá)。2.2 中國麻鴨ACE2目的基因PCR擴(kuò)增

酶切驗證結(jié)果如圖3B所示。HindⅢ單酶切后發(fā)現(xiàn)有1條5 127 bp左右的條帶(泳道2和5),大小與pMD-19T載體(2 692 bp)和目的基因(2 435 bp) 總和一致。因此本研究成功克隆了中國麻鴨ACE2基因的CDS序列。2.4 中國鴨ACE2基因陽性質(zhì)粒測序

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Evolution of the novel coronavirus from the ongoing Wuhan outbreak and modeling of its spike protein for risk of human transmission[J]. Xintian Xu,Ping Chen,Jingfang Wang,Jiannan Feng,Hui Zhou,Xuan Li,Wu Zhong,Pei Hao.  Science China（Life Sciences）. 2020(03)
[2]血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2在仔豬空腸中的分布表達(dá)及其與物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)系[J]. 李志強(qiáng),閆書平,紀(jì)曉霞,王凱,張源淑.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2019(08)
[3]利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)靶向敲除豬腸上皮細(xì)胞（IPEC-J2）ace2基因及其功能分析[J]. 王凱,王換換,劉穎,紀(jì)曉霞,張源淑.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2019(04)
[4]血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）對大鼠腎氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制[J]. 王艷霞,張偉,韓東寧,張源淑.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2011(05)



本文編號：3394017