犬是藥物安全性評價常用的實驗動物之一,控制與評價實驗犬的質(zhì)量,對保證臨床前藥物安全性評價十分重要。犬瘟熱（Canine distemper,CD）作為危害實驗犬的一種疾病,其致病源犬瘟熱病毒（Canine distemper virus,CDV）一直是實驗犬必須控制的一項指標。目前主要采用注射疫苗等免疫學方法控制。由于疫苗質(zhì)量、免疫程序、動物個體差異、以及檢測時機的問題,往往會出現(xiàn)免疫后抗體效價降低、全體免疫不合格等問題。而且,目前國家標準規(guī)定的血清學方法,檢測出的是血清抗體,并不是針對抵抗病毒感染的中和抗體。因而,對實驗犬質(zhì)量的評價存在一定問題。CDV中和抗體的檢測方法主要有CDV中和實驗,間接免疫酶染色法、ELISA檢測方法等。目前CDV中和抗體的檢測方法存在著一些弊端,例如結(jié)果的判定一般是通過觀察,而未能量化;操作過程繁雜,周期較長;結(jié)果不易判斷,容易誤判;CDV對理化因素敏感,難以通過常規(guī)病毒純化的方法獲得包被抗原。為此,本研究建立了犬瘟熱的假病毒系統(tǒng),病毒顆粒高度模擬原病毒,生物安全高,為CD的病毒學研究及其疫苗效力評價等提供了新的方法。本研究首先構(gòu)建具有不同長度胞質(zhì)區(qū)的H、... 

【文章來源】：中國食品藥品檢定研究院北京市

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同胞質(zhì)區(qū)長度的H、F基因擴增結(jié)果

圖 3 SDS-PAGE 鑒定含 CDV 不同胞質(zhì)區(qū)長度的 F、H 重組蛋同胞質(zhì)區(qū)長度的糖蛋白 H 電泳結(jié)果，其中野生型 H 蛋白大小為長度的糖蛋白 F 電泳后裂解為 F1 類片段的電泳結(jié)果，其中野生 F1 大小為 40 kDa；3：表示不同胞質(zhì)區(qū)長度的糖蛋白 F 電泳后野生型糖蛋白 F 基因的裂解片段 F2 大小為 23 kDa）病毒包裝體系的優(yōu)化質(zhì)粒的選擇、膜蛋白基因的修飾和骨架質(zhì)粒、囊膜質(zhì)粒共時間四個方面優(yōu)化包裝系統(tǒng)，最終達到假病毒的最高滴與 F 30 的組合有效的抑制了細胞融合，提高假示，表達麻疹病毒糖蛋白 H 和 F 的細胞會發(fā)生融合現(xiàn)象染初始 T 細胞的慢病毒轉(zhuǎn)染體系通過改變糖蛋白 H 和 細胞融合的現(xiàn)象[48]。而在本研究中，以 H 和 F 為囊膜蛋

24/F 20 、 H 24/F 24 、 H 24/F 26 、 H 24/F 30 ； 26/F 20 、 H 26/F 24 、 H 26/F 26 、 H 26/F 30 、 30/F 20、H 30/F 24、H 30/F 26、H 30/F 30）包被。研究發(fā)現(xiàn)，以 H 和 F 30 組合為囊膜糖蛋白包被出的犬以確定了以 H 和 F 30 為最佳組合，結(jié)果見圖 4。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]水貂抗犬瘟熱病毒中和抗體滴度的測定[J]. 刁非非,趙永峰,姜常青,韓鎧懌,謝之景.  山東畜牧獸醫(yī). 2016(08)
[2]犬瘟熱病毒核衣殼蛋白分子生物學研究進展[J]. 羅彬,易立,王建科,程世鵬.  特產(chǎn)研究. 2010(02)
[3]犬瘟熱免疫預防研究進展[J]. 孔慶波.  動物醫(yī)學進展. 2007(06)
[4]狐貉犬瘟熱、細小病毒性腸炎和腦(肝)炎流行病學調(diào)查[J]. 叢麗,閆新華,閆喜軍,吳威.  特產(chǎn)研究. 2000(02)
[5]犬實驗感染CDV的病理學研究[J]. 遇秀玲,田克恭,吳娜,隋麗華,李俊梅,劉永梅,渠川玫.  中國畜禽傳染病. 1998(02)
[6]犬瘟熱病毒抗體檢測方法的比較研究[J]. 喬貴林,夏咸柱,王度林,賈補年,袁書智,林慶年,王允海.  中國獸醫(yī)學報. 1997(01)
[7]犬瘟熱病毒野毒株融合蛋白主要功能區(qū)基因的變異研究[J]. 李金中,夏咸柱,殷震,李佑民,涂長春,金寧一.  中國獸醫(yī)學報. 1996(06)

碩士論文
[1]犬瘟熱病毒核蛋白基因的原核表達及檢測CDV抗體間接ELISA方法的建立[D]. 王琛.吉林大學 2007



本文編號：3392499