豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）可以引起一系列相關(guān)疾病,統(tǒng)稱(chēng)為豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾�。≒CVAD）,臨床典型的有斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、豬皮炎和腎病綜合征（PDNS）等。PCV2還可以破壞豬體免疫系統(tǒng),引起豬細(xì)小病毒病、副豬嗜血桿菌病、巴氏桿菌病等疾病的混合或繼發(fā)感染,給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。Cap蛋白由病毒基因ORF2編碼,是PCV2的主要結(jié)構(gòu)蛋白,具有PCV2的主要抗原表位,是PCV2疫苗和診斷試劑研究的主要靶向抗原。目前,我國(guó)已經(jīng)研制成功PCV2滅活疫苗,但安全性和免疫效力還不十分理想。本研究研制比較了PCV2疫苗用新型復(fù)合水佐劑,并且嘗試用畢赤酵母表達(dá)PCV2 Cap蛋白,為未來(lái)廉價(jià)PCV2疫苗研制奠定了基礎(chǔ)。具體研究?jī)?nèi)容如下：1、PCV2滅活疫苗新型水佐劑研制本研究以水性高分子聚合物卡波姆（CP）為基礎(chǔ),首先通過(guò)添加適量H和T蛋白,配置成兩種水溶性佐劑CPH和CPT,小鼠免疫試驗(yàn)結(jié)果顯示,CPH佐劑可以明顯增強(qiáng)PCV2滅活抗原抗體水平。然后以CP為基礎(chǔ),添加不同劑量的H蛋白,并以商品化的ISA206和Gel佐劑為對(duì)照,制成PCV2滅活疫苗,小鼠免疫試驗(yàn)結(jié)果顯示,CP... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 豬圓環(huán)病毒病診斷與疫苗研究進(jìn)展
    1 病原學(xué)
        1.1 病毒形態(tài)
        1.2 病毒基因組與編碼蛋白
        1.3 病毒致病性
        1.4 PCV2傳播
    2 診斷技術(shù)
        2.1 病原學(xué)診斷
        2.2 血清學(xué)診斷
    3 免疫防控
        3.1 全病毒滅活疫苗
        3.2 單位疫苗
        3.3 活載體疫苗
        3.4 基因疫苗
        3.5 弱毒疫苗
        3.6 PCV2疫苗佐劑
    參考文獻(xiàn)
第二章 豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗新型復(fù)合水性佐劑的研制
    1 材料與方法
        1.1 病毒、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和主要試劑
        1.2 比較CP、CPH、CPT的佐劑效果
        1.3 CPH佐劑中H蛋白的最適比例
        1.4 CPH佐劑與商品佐劑的比較
        1.5 CPH佐劑疫苗豬體免疫保護(hù)試驗(yàn)
        1.6 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與分析
    2 結(jié)果
        2.1 不同佐劑免疫效果的比較
        2.2 CPH佐劑中H蛋白最適濃度的篩選
        2.3 CPH佐劑與商品佐劑的比較
        2.4 豬體免疫保護(hù)試驗(yàn)
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第三章 豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白在畢赤酵母中的表達(dá)
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑
        1.2 引物設(shè)計(jì)
        1.3 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.4 重組質(zhì)粒線性化
        1.5 酵母GS115菌株感受態(tài)的制備
        1.6 重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化入酵母感受態(tài)
        1.7 重組酵母菌株的篩選
        1.8 重組酵母菌株的PCR鑒定
        1.9 目的蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
        1.10 表達(dá)上清中蛋白濃度測(cè)定及濃縮
        1.11 誘導(dǎo)產(chǎn)物的SDS-PAGE分析
        1.12 誘導(dǎo)上清的Western-blot鑒定
        1.13 電子顯微鏡下各蛋白形態(tài)特征
    2 結(jié)果
        2.1 目的基因的擴(kuò)增
        2.2 重組質(zhì)粒的鑒定
        2.4 誘導(dǎo)產(chǎn)物SDS-PAGE
        2.5 誘導(dǎo)產(chǎn)物Western-blot鑒定
        2.6 電鏡觀察
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第四章 酵母表達(dá)Cap蛋白的免疫特性研究
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑
        1.2 夾心ELISA方法測(cè)定不同蛋白抗原性
        1.3 不同疫苗的配制和小鼠免疫
        1.4 PCV2特異性ELISA抗體的檢測(cè)
        1.5 血清中和抗體的檢測(cè)
        1.6 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化增殖實(shí)驗(yàn)
        1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    2 結(jié)果
        2.1 夾心ELISA測(cè)定不同蛋白結(jié)果
        2.2 小鼠血清ELISA抗體水平
        2.3 血清中和抗體結(jié)果
        2.4 小鼠淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化結(jié)果
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]油乳佐劑及其安全性研究進(jìn)展[J]. 陳世豪,郝同楊,施祖灝,高玉時(shí),陸俊賢.  中國(guó)家禽. 2013(16)
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