豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）可以引起一系列相關疾病,統(tǒng)稱為豬圓環(huán)病毒相關疾�。≒CVAD）,臨床典型的有斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、豬皮炎和腎病綜合征（PDNS）等。PCV2還可以破壞豬體免疫系統(tǒng),引起豬細小病毒病、副豬嗜血桿菌病、巴氏桿菌病等疾病的混合或繼發(fā)感染,給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。Cap蛋白由病毒基因ORF2編碼,是PCV2的主要結構蛋白,具有PCV2的主要抗原表位,是PCV2疫苗和診斷試劑研究的主要靶向抗原。目前,我國已經(jīng)研制成功PCV2滅活疫苗,但安全性和免疫效力還不十分理想。本研究研制比較了PCV2疫苗用新型復合水佐劑,并且嘗試用畢赤酵母表達PCV2 Cap蛋白,為未來廉價PCV2疫苗研制奠定了基礎。具體研究內容如下：1、PCV2滅活疫苗新型水佐劑研制本研究以水性高分子聚合物卡波姆（CP）為基礎,首先通過添加適量H和T蛋白,配置成兩種水溶性佐劑CPH和CPT,小鼠免疫試驗結果顯示,CPH佐劑可以明顯增強PCV2滅活抗原抗體水平。然后以CP為基礎,添加不同劑量的H蛋白,并以商品化的ISA206和Gel佐劑為對照,制成PCV2滅活疫苗,小鼠免疫試驗結果顯示,CP... 

【文章來源】：南京農業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 豬圓環(huán)病毒病診斷與疫苗研究進展
    1 病原學
        1.1 病毒形態(tài)
        1.2 病毒基因組與編碼蛋白
        1.3 病毒致病性
        1.4 PCV2傳播
    2 診斷技術
        2.1 病原學診斷
        2.2 血清學診斷
    3 免疫防控
        3.1 全病毒滅活疫苗
        3.2 單位疫苗
        3.3 活載體疫苗
        3.4 基因疫苗
        3.5 弱毒疫苗
        3.6 PCV2疫苗佐劑
    參考文獻
第二章 豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗新型復合水性佐劑的研制
    1 材料與方法
        1.1 病毒、實驗動物和主要試劑
        1.2 比較CP、CPH、CPT的佐劑效果
        1.3 CPH佐劑中H蛋白的最適比例
        1.4 CPH佐劑與商品佐劑的比較
        1.5 CPH佐劑疫苗豬體免疫保護試驗
        1.6 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與分析
    2 結果
        2.1 不同佐劑免疫效果的比較
        2.2 CPH佐劑中H蛋白最適濃度的篩選
        2.3 CPH佐劑與商品佐劑的比較
        2.4 豬體免疫保護試驗
    3 討論
    參考文獻
第三章 豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白在畢赤酵母中的表達
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑
        1.2 引物設計
        1.3 重組質粒的構建
        1.4 重組質粒線性化
        1.5 酵母GS115菌株感受態(tài)的制備
        1.6 重組質粒電轉化入酵母感受態(tài)
        1.7 重組酵母菌株的篩選
        1.8 重組酵母菌株的PCR鑒定
        1.9 目的蛋白誘導表達
        1.10 表達上清中蛋白濃度測定及濃縮
        1.11 誘導產(chǎn)物的SDS-PAGE分析
        1.12 誘導上清的Western-blot鑒定
        1.13 電子顯微鏡下各蛋白形態(tài)特征
    2 結果
        2.1 目的基因的擴增
        2.2 重組質粒的鑒定
        2.4 誘導產(chǎn)物SDS-PAGE
        2.5 誘導產(chǎn)物Western-blot鑒定
        2.6 電鏡觀察
    3 討論
    參考文獻
第四章 酵母表達Cap蛋白的免疫特性研究
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑
        1.2 夾心ELISA方法測定不同蛋白抗原性
        1.3 不同疫苗的配制和小鼠免疫
        1.4 PCV2特異性ELISA抗體的檢測
        1.5 血清中和抗體的檢測
        1.6 淋巴細胞轉化增殖實驗
        1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    2 結果
        2.1 夾心ELISA測定不同蛋白結果
        2.2 小鼠血清ELISA抗體水平
        2.3 血清中和抗體結果
        2.4 小鼠淋巴細胞增殖轉化結果
    3 討論
    參考文獻
全文總結
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]油乳佐劑及其安全性研究進展[J]. 陳世豪,郝同楊,施祖灝,高玉時,陸俊賢.  中國家禽. 2013(16)
[3]基因佐劑的研究進展[J]. 滿朝來,常楊,唐高霞,趙麗,李鳳,甄鑫,弭曉菊.  中國生物工程雜志. 2013(07)
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[5]獸用疫苗佐劑研究現(xiàn)狀[J]. 戴波濤,趙剛.  現(xiàn)代畜牧獸醫(yī). 2013(02)
[6]豬圓環(huán)病毒2型疫苗的研究進展[J]. 王一平,郭龍軍,唐青海,劉長明.  畜牧獸醫(yī)學報. 2012(09)
[7]畢赤酵母蛋白表達系統(tǒng)研究進展[J]. 楊梅,溫真,林麗玉,楊彩云.  生物技術通報. 2011(04)
[8]巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)的研究進展和前景展望[J]. 婁瑞娟,羅利龍,張霞,張瑞剛,宋水山.  生物學雜志. 2010(05)
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[10]豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白核定位信號區(qū)抗原表位的鑒定[J]. 郭龍軍,陸月華,黃立平,危艷武,劉長明.  中國農業(yè)科學. 2010(07)



本文編號：3390582