發(fā)布時(shí)間：2021-09-04 23:41

　　非洲豬瘟（African swine fever, ASF）是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）感染引起的豬的高度接觸傳染性疾病,死亡率高達(dá)100%。ASF長(zhǎng)期在非洲流行,近年來流行范圍有逐漸擴(kuò)大的趨勢(shì),目前已經(jīng)蔓延至俄羅斯等鄰國,使我國養(yǎng)豬業(yè)面臨巨大威脅。ASF無任何疫苗用于防疫,因此建立快速、準(zhǔn)確的診斷方法對(duì)于防止該病傳入和擴(kuò)散具有重要意義。p54是ASFV的重要結(jié)構(gòu)蛋白,具有較強(qiáng)的免疫原性,因此常被用來檢測(cè)抗原,同時(shí)用重組蛋白代替活病毒抗原增加了檢測(cè)的安全性。本研究通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction,PCR）擴(kuò)增ASFV p54基因,插入原核表達(dá)載體pET-30a,將重組質(zhì)粒pET30a-P54轉(zhuǎn)化BLR（DE3）大腸桿菌,用IPTG誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá)。SDS-PAGE分析結(jié)果顯示,表達(dá)的His-p54融合蛋白為預(yù)期的21kD,且為可溶性表達(dá)。用鎳親和層析柱純化表達(dá)產(chǎn)物,得到了純度較高的His-p54融合蛋白。用純化的His-p54蛋白免疫BALB/c小鼠,采集脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行融合... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
目錄
符號(hào)說明
文獻(xiàn)綜述
    1. 非洲豬瘟病毒
        1.1 病毒分類
        1.2 病毒粒子的形態(tài)和結(jié)構(gòu)
        1.3 病毒基因組
        1.4 基因組編碼的蛋白
        1.5 非洲豬瘟病毒的感染機(jī)制
    2. 非洲豬瘟的流行病學(xué)特點(diǎn)
    3. 非洲豬瘟病的臨床癥狀與病理變化
        3.1 非洲豬瘟病的臨床癥狀
        3.2 非洲豬瘟病的剖檢變化
    4. 非洲豬瘟病毒的診斷
        4.1 血細(xì)胞吸附試驗(yàn)(HAD)
        4.2 ASFV抗原檢測(cè)
        4.3 病毒抗體試驗(yàn)
    5. 非洲豬瘟病的防治措施
    參考文獻(xiàn)
研究?jī)?nèi)容一：非洲豬癌病毒p54重組蛋白的原核表達(dá)及純化
    摘要
    1. 材料
        1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.2 工具酶和試劑
        1.3 培養(yǎng)基
        1.4 引物
        1.5 常用溶液
        1.6 主要儀器
    2. 方法
        2.1 非洲豬瘟病毒p54基因的擴(kuò)增
        2.2 PCR產(chǎn)物的回收
        2.3 驗(yàn)證載體pMD18T-p54的構(gòu)建
        2.4 表達(dá)載體pET-P54的構(gòu)建
        2.5 重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及分析
        2.6 重組蛋白的純化
        2.7 重組蛋白免疫原性檢測(cè)
    3. 結(jié)果
        3.1 p54基因的擴(kuò)增
        3.2 重組載體的鑒定
        3.3 表達(dá)載體鑒定
        3.4 重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及分析
        3.5 重組蛋白純化結(jié)果
        3.6 重組蛋白免疫原性檢測(cè)結(jié)果
    4. 討論
    參考文獻(xiàn)
研究?jī)?nèi)容二 非洲豬瘟病毒p54蛋白單克隆抗體的制備
    摘要
    1. 材料
        1.1 細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要試劑
        1.3 培養(yǎng)基
        1.4 主要儀器
    2. 方法
        2.1 小鼠的免疫
        2.2 飼養(yǎng)細(xì)胞的采集
        2.3 骨髓瘤細(xì)胞S/P20的準(zhǔn)備
        2.4 脾細(xì)胞的采集
        2.5 細(xì)胞融合
        2.6 陽性克隆的篩選
        2.7 陽性雜交瘤細(xì)胞的亞克隆
        2.8 腹水的制備
        2.9 單克隆抗體的亞類鑒定
        2.10 單克隆抗體的特異性檢測(cè)
        2.11 單克隆抗體效價(jià)的檢測(cè)
    3. 結(jié)果
        3.1 抗原最佳包被濃度和血清最佳稀釋倍數(shù)的確定
        3.2 雜交瘤細(xì)胞篩選及亞克隆
        3.3 單克隆抗體亞類的鑒定
        3.4 單克隆抗體特異性檢測(cè)
        3.5 腹水單克隆抗體的效價(jià)測(cè)定
    4. 討論
    參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]非洲豬瘟病毒p54蛋白的高效表達(dá)及在ELISA中的應(yīng)用[J]. 龔振華,王麗萍,臧京帥,張康,劉春菊,吳曉東,張啟迪,秦曉冰,陳琳琳,單虎,王樹雙,王志亮.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(11)
[2]非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)的研究與評(píng)價(jià)[J]. 郭少平,劉建,吳紹強(qiáng).  中國畜牧獸醫(yī). 2010(04)
[3]非洲豬瘟病毒P54基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)[J]. 侯艷梅,董志珍,趙祥平,李琳,肖妍,陳本龍,蔡國瑞,欒慎順,王建華.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2009(04)
[4]非洲豬瘟流行病學(xué)和診斷方法的研究進(jìn)展[J]. 王華,王君瑋,徐天剛,王志亮.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2008(06)
[5]融合標(biāo)簽技術(shù)及其應(yīng)用[J]. 李永進(jìn),陳媛媛,畢利軍.  生物工程學(xué)報(bào). 2006(04)
[6]非洲豬瘟間接ELISA診斷試劑盒的研究[J]. 蔣正軍,馬世東,蔡麗娟,單文魯,王樹雙,尹燕博,龔振華,李葳,宣華.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2000(S1)
[7]不同非洲豬瘟病毒株j5R基因及其編碼蛋白的比較[J]. 孫懷昌,Ｌｉｎｄａ ＫＤｉｘｏｎ,Ｒ Ｍ Ｅ Ｐａｒｋｈｏｕｓｅ.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 1999(02)



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