豬瘟是一種豬的烈性傳染病,其病原體豬瘟病毒（CSFV）屬于黃病毒科瘟病毒屬成員。蛋白質(zhì)的泛素化修飾是一種重要而廣泛的修飾過程,參與細胞內(nèi)許多生理過程。宿主利用泛素化修飾抵抗病毒的感染,而病毒利用泛素化修飾介導免疫逃逸。目前,文獻相繼報道,蛋白質(zhì)的泛素化修飾參與黃病毒科病毒的生命周期。前期,本實驗室將表達螢火蟲熒光素酶的報告病毒（rCSFV-Fluc）感染過表達豬源干擾素刺激基因（ISGs）的PK-15細胞系,篩選到E3泛素連接酶RNF114（ZNF313）為一種潛在的抗CSFV宿主分子,但其抗病毒機制尚不清楚。本研究旨在證實豬源RNF114（pRNF114）的抗CSFV活性,并解析其抑制CSFV復制的分子機制。我們檢測了CSFV感染過程中pRNF114的表達情況,結(jié)果表明,在CSFV-SM株感染豬的外周血單個核細胞（體內(nèi)）以及CSFV感染的PK-15、肺泡巨噬細胞和外周血單個核細胞（體外）中,RNF114的mRNA水平隨著CSFV感染時間、感染劑量的增加而上調(diào),說明pRNF114參與調(diào)控CSFV的復制。在pRNF114抗病毒功能方面:我們將不同劑量（MOI=0.01和0.1）的rCSF... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

豬瘟病毒基因組結(jié)構(gòu)模式圖（Jietal.,2015）

中國農(nóng)業(yè)科學院碩士學位論文 第二章 E3 泛素連接酶 pRNF114 的抗豬瘟病毒活性研究檢測 pRNF114 的 mRNA 水平，發(fā)現(xiàn)隨著感染時間的延長，pRNF114 mRNA 水平上調(diào)（圖 3A），在感染后 1 d 達到最高，3 d 和 5 d 有下降的趨勢，可能是由于機體的調(diào)節(jié)作用。同時，將 MOI=0.1CSFV-SM株分別接種PBMCs、PK-15和PAM細胞，于感染后6和12 h，分別檢測細胞內(nèi)的pRNF114的 mRNA 水平，發(fā)現(xiàn)隨著感染時間的增加，pRNF114 mRNA 水平上調(diào)（圖 3B、C 和 D）。此外，將不同劑量的 CSFV-SM 株感染 PAMs 細胞，發(fā)現(xiàn) pRNF114 的轉(zhuǎn)錄水平隨著感染劑量的增加而上調(diào)（圖 3E）。以上結(jié)果說明，CSFV 感染后誘導 pRNF114 表達上調(diào)，提示 pRNF114 在 CSFV 感染過程中發(fā)揮一定的作用。

敲除內(nèi)源性 RNF114 后，細胞內(nèi)的熒光素酶活性（圖 5C），病毒基因組拷貝數(shù)（圖5D）和病毒滴度（圖 5E）均顯著上升，說明敲除內(nèi)源性 RNF114 促進 CSFV 復制。過表達和敲除試驗均證實，pRNF114 具有抗 CSFV 復制的活性。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]中國豬瘟凈化之路:離我們還有多遠?[J]. 孫元,仇華吉.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2018(21)
[2]豬瘟兔化弱毒疫苗——半個世紀的回顧[J]. 仇華吉,童光志,沈榮顯.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2005(08)



本文編號：3381538