發(fā)布時間：2021-09-03 14:21

　　豬瘟（Classical swine fever,CSF）被國際獸醫(yī)組織OIE列為A類傳染病,由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起。近些年來,我國因感染CSFV死亡的豬的數(shù)量占全部疫病致死豬數(shù)量的三分之一以上,對國內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失和資源浪費。我國通常采用接種豬瘟弱毒疫苗等防控措施來控制豬瘟疫情的爆發(fā)。豬瘟疫情由大規(guī)模流行逐漸轉(zhuǎn)化為無規(guī)律散發(fā)流行,盡管免疫時的疫苗劑量和頻率都有所增加,但仍未有效及時地控制住豬瘟的蔓延。由于濫用豬瘟弱毒疫苗以及野毒株的變異,豬瘟疫情出現(xiàn)慢性、隱性感染,導(dǎo)致難以區(qū)分疫苗免疫豬與野毒感染豬,從而使疫情更加難以控制。因此,研制能鑒別診斷、安全高效的新型基因工程亞單位疫苗是全世界養(yǎng)豬業(yè)的迫切需求。為制備具有免疫原性的CSFV E2蛋白,并對其進(jìn)行純化和免疫原性分析。將E2基因插入原核表達(dá)載體pET-28a中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a-E2。并將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21（DE3）中誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)SDS-PAGE電泳和Western-Blot結(jié)果證明,本試驗成功表達(dá)出可溶的E2蛋白。分別對IPTG的終濃度、誘導(dǎo)溫... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CSFV病毒粒子結(jié)構(gòu)

圖 2.CSFV 基因組的組織，多蛋白加工與蛋白拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)[23]Fig.2 The organization of the CSFV genome, polyprotein processing and protein topography[23].2 豬瘟蛋白結(jié)構(gòu)和功能核衣殼C蛋白位于多聚蛋白N端，Erns蛋白和蛋白水解酶Npro之間，分子量為14 kD[白是小分子衣殼蛋白，由 Arg、Lys 等 86 個氨基酸組成[25]。C 蛋白可調(diào)控病毒基因毒粒子的成熟，病毒粒子C蛋白與病毒基因組RNA形成的復(fù)合物可保護(hù)病毒基因組究表明 C 蛋白對于病毒的感染、組裝以及病毒感染的發(fā)病機(jī)制起到重要作用[27]。Erns是由 227 個氨基酸組成的大小為 44 kD 的囊膜糖蛋白。Erns蛋白常通過二硫鍵連分子量為 100 kD 的同源二聚體[28]，最新研究表明 Erns蛋白糖基化位點與 CSFV 毒力定關(guān)系[29]。Erns可以附著于各物種的細(xì)胞表面，Erns的易位不依賴能量，同時不由蛋白介導(dǎo)，以便其通過真核細(xì)胞膜[30]。Erns蛋白可誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡，在其缺失后，C明顯下降[31]。E1 是由 195 個氨基酸組成的分子量約為 33 kD 的囊膜糖蛋白[32]。E1 和 E2 形成的聚體可介導(dǎo) CSFV 入侵動物機(jī)體[33]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在 Brescia 強(qiáng)毒株 E1 蛋白 C 端插入 1酸殘基構(gòu)成 CSFV 突變株[34]。突變株較 CSFV 強(qiáng)毒株，病毒復(fù)制減少，發(fā)病和傳染

圖 3.CSFV 與宿主細(xì)胞之間的相互作用途徑[48]Figure.3 Interaction pathways between CSFV and host cells[48] 豬瘟病毒病原學(xué)和流行病學(xué)特征.1 病毒的病原學(xué)特征CSFV 是直徑約為 50 nm 的球型病毒�；蚪M為單股正鏈的線狀 RNA，形成對稱的二面體結(jié)構(gòu)。CSFV 可在 37 ℃培養(yǎng)物中存活 7 d，在 60 ℃存活 0.5 h，豬瘟病毒 56 ℃作用 以上才將其滅活[49]。CSFV 在弱堿或弱酸性環(huán)境中均保持穩(wěn)定，其最適宜 pH 為 5.2。CSFV毒粒子在-70 ℃可存活多年不喪失感染性，對研究豬瘟流行病學(xué)有重要意義。目前大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為 CSFV 只有 1 種血清型，但血清中和試驗及遺傳進(jìn)化研究結(jié)果表明FV 可能存在同一血清型的血清學(xué)亞種，分為 3 種基因群，其中我國廣泛流行的為基因 250]。上世紀(jì) 60 年代中期，學(xué)者 Menge[51]分離出低毒力毒株。上世紀(jì) 70 年代末，日本科上條泰雄將 CSFV 株分成 B 群和 H 群，易發(fā)生中和反應(yīng)的弱毒株稱 B 群(弱毒株)，而發(fā)生中和反應(yīng)的強(qiáng)毒株稱 H 群[52]。.2 病毒的流行病學(xué)中國是生豬養(yǎng)殖業(yè)大國，每年因豬瘟造成大量的經(jīng)濟(jì)損失。我國于 1954 年研制出豬瘟

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬瘟研究現(xiàn)狀簡述[J]. 朱生榮.  國外畜牧學(xué)(豬與禽). 2017(06)
[2]新型豬瘟疫苗的研究進(jìn)展[J]. 張雙,郭慧,徐浩,孟繁星,胡桂學(xué).  中國獸醫(yī)雜志. 2015(01)
[3]豬瘟國內(nèi)流行情況及凈化技術(shù)[J]. 張浩吉.  獸醫(yī)導(dǎo)刊. 2015(01)
[4]我國豬瘟流行現(xiàn)狀與防控措施[J]. 范燦洪,楊大慰.  當(dāng)代畜牧. 2014(33)
[5]豬瘟與豬弓形蟲病的鑒別和診治[J]. 路偉,李永彬,路方.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2014(12)
[6]國務(wù)院辦公廳關(guān)于印發(fā)國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）的通知[J].   青海農(nóng)牧業(yè). 2013(02)
[7]豬瘟的流行特點及防制[J]. 王素坤.  養(yǎng)殖技術(shù)顧問. 2013(05)
[8]蛋白質(zhì)的糖基化作用及其在生物制藥中的應(yīng)用[J]. 董炳梅,王金良,張春玲,魏鳳,呂素芳,祖立闖,汪洋,沈志強(qiáng).  中國畜牧獸醫(yī). 2012(11)
[9]中國豬瘟發(fā)生風(fēng)險定性評估[J]. 姚文生,范學(xué)政,王琴,寧宜寶.  中國畜牧獸醫(yī). 2011(12)
[10]豬瘟病毒分子生物學(xué)與致病機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 南文金,胡鴻惠,彭國良,婁高明.  韶關(guān)學(xué)院學(xué)報. 2011(08)

博士論文
[1]基于DNA的核酸、酶及生物小分子的免標(biāo)記熒光檢測研究[D]. 劉文婷.武漢大學(xué) 2016
[2]CSFV和PCV2感染后免疫抑制性受體轉(zhuǎn)錄水平研究及阻斷豬PD-1/PD-L1通路多肽基序鑒定[D]. 岳鋒.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]豬圓環(huán)病毒-Ⅱ型抗體檢測免疫層析試紙的研制及單克隆抗體的篩選與鑒定[D]. 金前躍.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]豬瘟病毒感染蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 孫金福.吉林大學(xué) 2008
[5]豬水皰病和豬瘟基因工程亞單位疫苗的研究[D]. 田宏.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2006
[6]CSFV石門株基因組感染性克隆的構(gòu)建與致細(xì)胞病變分子機(jī)制研究[D]. 吳海祥.武漢大學(xué) 2003

碩士論文
[1]豬瘟病毒囊膜E2蛋白原核表達(dá)及初步應(yīng)用研究[D]. 郭鶴.吉林大學(xué) 2013
[2]廣西CSFV地方株的分離、全基因序列測定分析和致病性研究[D]. 張民秀.廣西大學(xué) 2012
[3]重組豬瘟病毒E2桿狀病毒的構(gòu)建及其在蠶蛹中表達(dá)重組豬瘟E2蛋白[D]. 胡剛?cè)~.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]PRRSV、CSFV和PCV-2多重PCR診斷方法及基因芯片診斷方法的建立[D]. 葉芬.西南大學(xué) 2011
[5]CSFV SM株感染對豬外周血白細(xì)胞的影響以及在豬體內(nèi)的分布[D]. 周遠(yuǎn)成.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[6]豬瘟病毒特異性單克隆抗體的研究[D]. 朱妍.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
[7]豬瘟病毒SM株單克隆抗體的制備、初步鑒定及應(yīng)用研究[D]. 韋英益.廣西大學(xué) 2004
[8]豬瘟病毒E2基因的表達(dá)及其間接ELISA診斷方法的研究[D]. 胡慧.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2004



本文編號：3381274