最近幾年,在我國(guó)肉鴨養(yǎng)殖地區(qū)出現(xiàn)一種以脾臟壞死為特征的疾病,該病主要造成患鴨大群精神狀態(tài)差,飲水、采食均出現(xiàn)下降并伴有死亡,脾臟壞死后機(jī)體免疫力下降容易繼發(fā)感染造成更高的死亡率,耐過鴨發(fā)育受阻、生長(zhǎng)緩慢,成為僵鴨。目前,大多數(shù)研究者認(rèn)為新型鴨呼腸孤病毒（New type duck reovirus,NDRV）是造成該病的主要病原,針對(duì)該病發(fā)病日齡小、病情發(fā)展快、容易快速傳播的特點(diǎn),急需建立一種快速、精確、可靠的檢測(cè)方法應(yīng)用于該病早期定性與定量診斷。本研究從患鴨的壞死脾臟中分離到一株NDRV,對(duì)分離的毒株進(jìn)行了序列分析及致病性研究。針對(duì)該病建立了TaqMan探針熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法,并利用該方法對(duì)病毒在感染肉鴨不同組織器官中的分布、排毒規(guī)律及病毒血癥情況進(jìn)行了監(jiān)測(cè),為該病的防控提供了理論依據(jù)。根據(jù)NDRV S2基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物和一條特異性探針,擴(kuò)增長(zhǎng)度85 bp。將擴(kuò)增的片段連接到pMD18-T載體上構(gòu)建重組質(zhì)粒,經(jīng)篩選、測(cè)序鑒定后,倍比稀釋作為標(biāo)準(zhǔn)品,優(yōu)化反應(yīng)條件后構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立檢測(cè)NDRV的TaqMan探針熒光定量RT-PCR方法。該方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線有良好的線性關(guān)系,線... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

組織樣品感染后致雞胚病變Fig.1Cytopathiceffectofchickenembryoinducedbytissuesamples

針尖狀出血點(diǎn)，剖檢病變主要是肝臟腫大、出血以及壞死灶的出現(xiàn)（見圖圖 1 組織樣品感染后致雞胚病變Fig. 1 Cytopathic effect of chicken embryo induced by tissue samplesa.胚體出血；b.肝臟腫大、出血、壞死a. Embryonic bleeding ;b.Liver enlargement, hemorrhage, necrosisl品處理液感染生長(zhǎng)狀態(tài)良好的雞胚肝細(xì)胞，從第三代開始出現(xiàn)以細(xì)胞融合病變（見圖 2），到第五代時(shí)細(xì)胞病變出現(xiàn)時(shí)間以及病變程度趨于穩(wěn)定，0%的細(xì)胞可出現(xiàn)典型病變。

圖 3 NDRV σC 基因 PCR 擴(kuò)增結(jié)果Fig. 3 PCR amplification of NDRV σC gene；2.細(xì)胞病毒液 PCR 產(chǎn)物；3.陰性對(duì)照； M.-2.the σC gene of NDRV；3.Negative control分析第 3 個(gè)閱讀框編碼的結(jié)構(gòu)蛋白，位產(chǎn)生保護(hù)性中和抗體（Zhang Y, 20白，是目前唯一能夠從被 ARV 感染類細(xì)胞，與病毒的吸附、增殖、致了解分離株病毒與 ARV 之間的進(jìn)與已發(fā)表的 ARV 分離株的σC 基因的繪制。結(jié)果如圖 4 所示，ARV 進(jìn)和水禽源分支，水禽源呼腸孤分支

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本文編號(hào)：3380378