間隙連接蛋白43（connexin43,Cx43）是哺乳動(dòng)物顆粒細(xì)胞特異表達(dá)的關(guān)鍵蛋白,在卵泡發(fā)育與卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中起著不可或缺的作用。卵母細(xì)胞內(nèi)高水平環(huán)磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）對(duì)維持減數(shù)分裂停滯至關(guān)重要,雖然卵母細(xì)胞自身能合成cAMP,但研究表明,Cx43蛋白磷酸化引起的間隙連接通道關(guān)閉所造成的卵丘細(xì)胞向卵母細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)的cAMP下降是維持卵母細(xì)胞減數(shù)分裂的重要原因。另有研究報(bào)道,人為提升牛卵丘-卵母復(fù)合體（cumulus-oocyte complexes,COCs）內(nèi)cAMP水平反過(guò)來(lái)能夠顯著增強(qiáng)復(fù)合體間隙連接功能,但是綿羊卵泡內(nèi)cAMP水平與間隙連接蛋白Cx43蛋白表達(dá)或者功能變化的相關(guān)性,尚未見(jiàn)研究報(bào)道。本研究采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)綿羊未成熟COCs中Cx43蛋白表達(dá),然后分別采用競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)和免疫印跡法檢測(cè)了體外成熟過(guò)程中cAMP水平變化和Cx43磷酸化蛋白和總蛋白表達(dá)的情況。在不含促性腺激素的作用下,探究了 cAMP非特異性調(diào)節(jié)劑對(duì)綿羊COCs內(nèi)cAMP的時(shí)間效應(yīng),以及cAMP對(duì)Cx43蛋白表達(dá)情況。結(jié)... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１連接蛋白結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇ．?１?Ｃｏｎｎｅｘｉｎ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ??

８環(huán)磷酸腺苷在綿羊卵丘－卵母細(xì)胞復(fù)合體體外成熟過(guò)程中對(duì)間隙連接蛋白４３表達(dá)的調(diào)控研究??■■隱??圖２?Ｃｘ４３蛋白在綿羊卵丘一卵母細(xì)胞復(fù)合體（ＣＯＣ）中的表達(dá)??Ｆｉｇ．２?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?Ｃｘ４３?ｉｎ?ｏｖｉｎｅ?ｃｕｍｕｌｕｓ－ｏｏｃｙｔｅ?ｃｏｍｐｌｅｘ?（ＣＯＣ）??注：Ｃｘ４３蛋白染色使用Ａｌｘ４８８偶聯(lián)二抗（綠色）；試驗(yàn)組：Ａ：合并圖，ａ】：Ｃｘ４３，?ａ２：?ＤＡＰＩ，?ａ：?ＣＯＣｓ形態(tài)圖；??對(duì)照組：Ｂ：合并圖，ｂ１：?Ｃｘ４３，?ｂ２：?ＤＡＰＩ，?ｂ：?ＣＯＣｓ形態(tài)圖??２．４討論與小結(jié)??２．４．１討論??基于本實(shí)驗(yàn)室前期建立新型ＣＯＣｓ石蠟切片技術(shù)，本試驗(yàn)檢測(cè)了?Ｃｘ４３蛋白在未??成熟綿羊ＣＯＣｓ中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，Ｃｘ４３只存在于綿羊卵丘細(xì)胞中，卵母細(xì)??胞內(nèi)未發(fā)現(xiàn)Ｃｘ４３蛋白的表達(dá)。在小鼠［７６］和牛［７７］的研宄中，所有卵泡發(fā)育階段的ＧＣｓ??中均有Ｃｘ４３表達(dá)，未在卵母細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)Ｃｘ４３基因與蛋白。在人的研宄中？，?Ｃｘ４３??蛋白主要定位于卵丘細(xì)胞。最新的一項(xiàng)研宄表明，在山羊原始卵泡到有腔卵泡的形成??過(guò)程中，其顆粒細(xì)胞、膜細(xì)胞和透明帶中均表達(dá)Ｃｘ４３ｗ］。本研究結(jié)果并未顯示Ｃｘ４３??蛋白在綿羊透明帶上的定位特征，這可能源于本試驗(yàn)所采用ＣＯＣ切片技術(shù)的差異性，??但上述研宄結(jié)果與本研宄發(fā)現(xiàn)是一致的，即Ｃｘ４３蛋白僅存在于卵丘細(xì)胞。有關(guān)豬的??相關(guān)研宄顯示，Ｃｘ４３蛋白在未成熟卵母細(xì)胞中有表達(dá)，在減數(shù)分裂過(guò)程中其表達(dá)呈??動(dòng)態(tài)變化特征，推測(cè)其原因可能在于卵丘細(xì)胞內(nèi)合成的Ｃｘ４３，隨后被運(yùn)輸至卵母細(xì)??胞中，以供形成卵母與卵丘細(xì)胞間的間隙連接通道［８°］，表明Ｃｘ４

?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文?１３??７〇１?；?．?．?；?；?；?，?１?；???５〇??＼?ｉ?［■?｜?－Ｉ?；?［?■＊???＼?ｉ?Ｉ?！?ｉ?Ｉ?ｉ?！?Ｉ?：??翅?４Ｕ??ｉ?［?－「?「?１??：?１???｜３〇?？…．－…．］……－１？…ｊ．…．］一…．??２０?ｌ－．??１??ｔ?－！?！?１＊—￣￣ｉ——??！?！?Ｉ?Ｉ?Ｉ?！??１０?卜…，：?卜…＾－???■：？???；；；；？；；?丨?ｉ?１?Ｈ?ｌ??°０?１２３４５６７８９?１０??ｃＡＭＰ＾Ｒ度?／?（?ｐｍｏｌ／ｍＬ〉??圖３?ｃＡＭＰ標(biāo)準(zhǔn)曲線圖??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｇｒａｐｈ?ｏｆ?ｃＡＭＰ??３．３．２體外成熟過(guò)程中卵母細(xì)胞內(nèi)ｃＡＭＰ水平變化??本試驗(yàn)檢測(cè)了體外成熟培養(yǎng)不同時(shí)間點(diǎn)卵母細(xì)胞中ｃＡＭＰ水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖４??所示，在體外成熟培養(yǎng)３０ｍｉｎ內(nèi)卵母細(xì)胞ｃＡＭＰ含量緩慢升高，隨后持續(xù)下降。其??中胞內(nèi)ｃＡＭＰ在成熟培養(yǎng)３０ｍｉｎ時(shí)達(dá)到頂峰值，在培養(yǎng)６ｈ時(shí)顯示最低水平，兩者與??Ｏｈ相比，均差異顯著（尸＜０．０５）。??


本文編號(hào)：3373913