RNA干擾（RNAinterference,RNAi）是一種強(qiáng)大的基因沉默技術(shù),它的發(fā)現(xiàn)為了解病毒與宿主之間的相互作用提供了又一新視角,在抗病毒領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景。豬繁殖與呼吸綜合征（俗稱(chēng)藍(lán)耳病,PRRS）是危害豬業(yè)生產(chǎn)的重大疫病之一,在全世界受到高度關(guān)注。研究表明,PRRS病毒（PRRSV）復(fù)制過(guò)程中也存在RNAi現(xiàn)象,并成功構(gòu)建特異性靶向PRRSV基因組的高效表達(dá)shRNA質(zhì)粒和病毒載體,為豬繁殖與呼吸綜合征防治提供了新的探索方向。哺乳動(dòng)物胚胎生物技術(shù)的日益發(fā)展及其與現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的結(jié)合,使得利用遺傳修飾開(kāi)展轉(zhuǎn)基因抗病育種成為可能。轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)是以轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞為核供體,通過(guò)核移植生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因胚胎或動(dòng)物的一種先進(jìn)技術(shù)手段。將RNAi和轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)相結(jié)合制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物,已被用作人類(lèi)疾病的動(dòng)物模型及動(dòng)物抗病育種研究；但迄今尚未見(jiàn)到具有抗豬藍(lán)耳病特性的相關(guān)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)的報(bào)道。轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)本身依然存在效率低、外源基因表達(dá)不穩(wěn)定等問(wèn)題。已有的研究表明,體細(xì)胞重編程過(guò)程中,DNA甲基化、組蛋白乙�；瘜�(duì)克隆效率和轉(zhuǎn)基因表達(dá)都有直接的影響。本研究將具有抗PRRSV特性的shRNA表達(dá)盒... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：137 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)及縮略語(yǔ)
前言
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 體細(xì)胞核移植與轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)
        1 動(dòng)物體細(xì)胞核移植
        1.1 體細(xì)胞核移植技術(shù)研究簡(jiǎn)史
            1.2 體細(xì)胞核移植程序
                1.2.1 受體細(xì)胞準(zhǔn)備
                1.2.2 供核細(xì)胞的選擇
                1.2.3 重構(gòu)胚的構(gòu)建
                1.2.4 重構(gòu)胚激活
                1.2.5 克隆胚胎培養(yǎng)
            1.3 體細(xì)胞核移植重編程機(jī)理
                1.3.1 DNA甲基化
                1.3.2 組蛋白乙�；�
                1.3.3 基因印跡
                1.3.4 端粒問(wèn)題
        2 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)
            2.1 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的制作方法
                2.1.1 原核注射法
                2.1.2 病毒載體法
                2.1.3 精子載體法
                2.1.4 胚胎干細(xì)胞法
                2.1.5 體細(xì)胞核移植法
            2.2 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物應(yīng)用
                2.2.1 在生命科學(xué)研究領(lǐng)域的應(yīng)用
                2.2.2 在醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的應(yīng)用
                2.2.3 在畜牧改良上的應(yīng)用
                2.2.4 動(dòng)物抗病育種
                2.2.5 動(dòng)物生物反應(yīng)器
        3 影響轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物生產(chǎn)的因素
            3.1 克隆程序
                3.1.1 受體卵母細(xì)胞質(zhì)量
                3.1.2 供核細(xì)胞
            3.2 表觀遺傳修飾對(duì)外源基因表達(dá)的影響
        參考文獻(xiàn)
    第二章 RNAi技術(shù)在動(dòng)物抗病毒研究中的應(yīng)用前景
        1 RNAi技術(shù)
        2 RNAi技術(shù)原理
        3 RNAi技術(shù)在動(dòng)物抗病毒研究中的應(yīng)用
        4 病毒逃逸RNAi
        5 基于RNAi技術(shù)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)
        6 RNAi的問(wèn)題和展望
        參考文獻(xiàn)
第二部分 試驗(yàn)研究
    第三章 靶向PRRSV的shRNA轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體構(gòu)建及其功能驗(yàn)證
        摘要
        1 材料
        2 方法
        3 結(jié)果
            3.1 shRNA轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體構(gòu)建結(jié)果
            3.2 shRNA轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體在Marc145細(xì)胞上抑制PRRSV復(fù)制試驗(yàn)
        4 討論
        5 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第四章 核供體細(xì)胞對(duì)豬轉(zhuǎn)基因克隆胚胎體外生產(chǎn)的影響
        摘要
        1 材料
        2 方法
        3 結(jié)果
            3.1 豬成纖維細(xì)胞建系
            3.2 G418篩選
            3.3 陽(yáng)性細(xì)胞克隆的PCR鑒定
            3.4 轉(zhuǎn)基因核供體細(xì)胞對(duì)豬克隆胚胎發(fā)育的影響
        4 討論
            4.1 豬成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)
            4.2 轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性細(xì)胞克隆的篩選、傳代培養(yǎng)和保存
            4.3 不同轉(zhuǎn)基因供核細(xì)胞對(duì)豬克隆胚發(fā)育的影響
        5 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第五章 豬轉(zhuǎn)基因克隆胚胎體外發(fā)育的研究
        摘要
        1 材料
        2 方法
        3 結(jié)果
            3.1 培養(yǎng)液對(duì)豬孤雌激活胚胎體外發(fā)育的影響
            3.2 激活方法對(duì)豬轉(zhuǎn)基因克隆胚胎體外發(fā)育的影響
            3.3 曲古抑菌素A對(duì)豬轉(zhuǎn)基因克隆胚胎體外發(fā)育的影響
        4 討論
            4.1 胚胎體外培養(yǎng)液
            4.2 重構(gòu)胚激活
            4.3 曲古抑菌素A對(duì)豬轉(zhuǎn)基因克隆胚胎體外發(fā)育的影響
        5 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第六章 曲古抑菌素A影響豬轉(zhuǎn)基因克隆胚胎發(fā)育的機(jī)理研究
        摘要
        1 材料
        2 方法
        3 結(jié)果
            3.1 曲古抑菌素A對(duì)豬轉(zhuǎn)基因克隆胚胎組蛋白乙�；降挠绊�
            3.2 曲古抑菌素A對(duì)豬轉(zhuǎn)基因克隆胚胎發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)的影響
            3.3 曲古抑菌素A對(duì)豬轉(zhuǎn)基因克隆胚胎外源基因表達(dá)的影響
        4 討論
            4.1 豬轉(zhuǎn)基因克隆胚胎表觀遺傳修飾狀態(tài)與胚胎的發(fā)育
            4.2 豬轉(zhuǎn)基因克隆胚胎發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)與胚胎的發(fā)育
            4.3 豬轉(zhuǎn)基因克隆胚胎表觀遺傳修飾狀態(tài)與外源基因表達(dá)
        5 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
攻讀博士學(xué)位期間論文發(fā)表情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3373150