為建立可同時(shí)檢測J亞群禽白血病病毒（ALV）、網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒（REV）和馬立克病病毒（MDV）的方法,本研究以ALV-J的ENV基因、REV的LTR區(qū)以及MDV的MEQ基因?yàn)闄z測對象,建立了可同時(shí)檢測ALV-J、REV、MDV的多重?zé)晒舛縋CR方法并對其特異性、靈敏性、穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示,該方法僅可特異擴(kuò)增3種腫瘤病病毒的基因,對禽流感病毒、新城疫病毒、腺病毒等核酸擴(kuò)增均呈陰性;ALV-J、REV和MDV的最低核酸檢測限分別為35 copies/μL、5.1 copies/μL和62 copies/μL;此外,批內(nèi)與批間重復(fù)試驗(yàn)Ct值的變異系數(shù)均小于2%。利用此方法對166份送檢樣品進(jìn)行檢測,其中ALV-J、REV和MDV檢出率分別為25.3%、7.2%和5.4%,混合感染檢出率為3.6%。以上結(jié)果表明,本方法特異性好、靈敏度高、穩(wěn)定性強(qiáng),能夠同時(shí)檢測ALV-J、REV和MDV,可用于禽腫瘤病的鑒別診斷、流行病學(xué)調(diào)查以及疫病防控。 

【文章來源】：中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2020,28(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

多重?zé)晒舛縋CR的標(biāo)準(zhǔn)曲線

多重?zé)晒舛縋CR特異性試驗(yàn)結(jié)果

分別使用OIE推薦的常規(guī)PCR和本文建立的多重?zé)晒舛縋CR方法對來自湖北不同地區(qū)的51份腫瘤性病變組織和115份其他病變組織進(jìn)行檢測,結(jié)果見表3。多重?zé)晒釶CR共檢出ALV-J單一感染36例,REV單一感染7份,MDV單一感染5例,ALV-J、REV雙重感染2例,ALV-J、MDV雙重感染1例以及ALV-J、REV、MD三重感染3例。而普通PCR除了對ALV-J單一感染檢出率比多重?zé)晒釶CR稍低,其他檢測結(jié)果保持一致。表明本文建立的多重?zé)晒舛縋CR方法適用于禽腫瘤病的臨床樣品的鑒別檢測。表2 多重?zé)晒舛縋CR重復(fù)性試驗(yàn)Table 2 Intra-assay and inter-assay reproducibility test of real-time PCR assay 病毒Virus 稀釋倍數(shù)Dilution ratio 批內(nèi)重復(fù)Intra-assay reproducibility 批間重復(fù)Inter-assay reproducibility 平均值 SD CV(%) 平均值 SD CV(%) ALV-J 103 17.23 0.15 0.87 17.53 0.12 0.68 104 20.45 0.10 0.48 20.54 0.23 1.11 105 23.51 0.14 0.59 23.60 0.15 0.63 REV 103 18.74 0.13 0.69 18.78 0.16 0.85 104 21.03 0.03 0.14 22.12 0.20 0.54 105 25.32 0.23 0.91 25.43 0.35 1.37 MDV 103 16.13 0.10 0.62 16.54 0.14 0.84 104 19.18 0.12 0.62 19.02 0.07 0.36 105 22.54 0.19 0.84 22.74 0.23 1.01

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2017年廣西及周邊地區(qū)地方品種雞三種腫瘤病的流行病學(xué)調(diào)查[J]. 石夢雅,李海娟,王威威,谷戰(zhàn)明,王培坤,林璐璐,梁競臻,韋平.  中國家禽. 2019(03)
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[4]J亞群禽白血病研究進(jìn)展[J]. 李建亮,崔言順.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2010(S1)

碩士論文
[1]ALV引起的免疫抑制對馬立克氏病疫苗免疫保護(hù)效果的影響[D]. 林璐璐.廣西大學(xué) 2018



本文編號：3372337