EV71（Enterovirus71）引發(fā)的手足口病在近年來的發(fā)病率仍然很高。截止目前，對于EV71感染，尚沒有有效的疫苗和治療辦法。干擾素作為廣譜抗病毒藥物，已成功用于多種病毒感染疾病的治療，研究顯示干擾素可抑制EV71的復制，但EV71病毒也可在一定程度上逃避干擾素的抑制作用。本實驗旨在探索EV71拮抗干擾素抗病毒作用的機制。本實驗獲取五株EV71病毒：安徽株（Anhui2007）一株，VR1432和VR1775（購自ATCC，American Type Culture Collection，美國模式菌種保藏庫），GDV103和GDV102（購自CCTCC，China Center for Type Culture Collection，中國典型培養(yǎng)物保藏中心）。根據GenBank中EV71的全基因組序列設計了6對引物，分段擴增了覆蓋EV71（安徽株，VR1432，GDV103）基因組全長序列的6個重疊片段，并進行序列測定和分析。三株EV71全基因組核苷酸序列已被GenBank數據庫收錄，Anhui2007（安徽株）、VR1432和GDV103的登陸編號分別為KC954662、KC... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學院北京市

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

EV71基因組結構

S RTase Mix ward erse R 程序如下：95℃ 10s；擴增反應 95℃ 5s，55℃-95℃ 做融解曲線。測定 的滴度如下：Anhui2007：8×106 PFU/ml；VR14326 PFU/ml；GDV103：60×106 PFU/ml；GDV102：

圖 1.2 EV71 全序列 nt 遺傳進化分析2.3 結晶紫染色結果結晶紫染色的方法能夠直觀反應細胞病變。病毒感染細胞后，隨著感染時間的延長，細胞病變而死亡脫落。結晶紫作為一種活細胞染料，只能對活細胞著色。而預先進行不同濃度的干擾素保護后，病毒的復制會受到不同程度的抑制，則根據活細胞數的不同，結晶紫的著色深淺會與干擾素濃度呈現一致性。從結晶紫染色分析的結果看，在 Vero E6 細胞中，IFN-ω 比 IFN-α2b 的保護效果要好（見圖1.3）。從圖 1.3 看，IFN-ω 保護 VR1432、Anhui、GDV103 和 GDV102 四株病毒感染細胞的 EC50 分別為 1810.7 IU/ml、931.5 IU/ml、385.8 IU/ml、40.6 IU/ml；IFN-α2b 保護 GDV102 感染細胞的 EC50 為 846.9 IU/ml，當 IFN-α2b 的濃度達到50000 IU/ml 時，對 VR1432、Anhui、GDV103 三株病毒感染的細胞仍沒有達到100%的保護效果。2.4 定量 PCR 法檢測干擾素對 EV71 復制的影響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]The interferon inducing pathways and the hepatitis C virus[J]. Eliane F Meurs,Adrien Breiman.  World Journal of Gastroenterology. 2007(17)



本文編號：3369040