由于干擾素具有良好的廣譜抗病毒活性和有效的免疫調(diào)節(jié)功能,對(duì)于研發(fā)有效的抗病毒生物制劑及增強(qiáng)疫苗效果的佐劑具有重要的意義。本研究利用基因工程技術(shù),以吉林白鵝α/γ干擾素基因（JGIFN-α/γ）為研究對(duì)象,對(duì)其進(jìn)行了克隆、表達(dá)及抗病毒活性研究。同時(shí)為了進(jìn)一步研究JGIFN-γ作為佐劑的免疫增強(qiáng)作用,成功構(gòu)建了帶有分子免疫佐劑JGIFN-γ的GPV-VP3基因疫苗并對(duì)雛鵝進(jìn)行了免疫,為研發(fā)高效的鵝細(xì)小病毒基因疫苗奠定了基礎(chǔ),本研究具體進(jìn)行了以下幾方面的工作：1、吉林白鵝α干擾素成熟肽原核表達(dá)及抗病毒活性的研究參照已克隆得到的JGIFN-α完整的ORF基因序列設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物,克隆得到了編碼α干擾素的成熟肽基因（mJGIFN-a）。利用pET28a （+）作為原核表達(dá)載體,成功構(gòu)建了吉林白鵝α干擾素基因的原核表達(dá)質(zhì)粒pET-mJGIFN-a。將該重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入E.coli Rossetta菌中進(jìn)行了表達(dá),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)、SDS-PAGE和western-blot分析表明獲得了分子量為22ku的包涵體蛋白。將包涵體蛋白經(jīng)Ni-IMAC親和層析法純化及稀釋透析復(fù)性后,得到了與預(yù)期結(jié)果一致... 

【文章來(lái)源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁(yè)數(shù)】：119 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 干擾素的研究進(jìn)展
        1.1 干擾素分類(lèi)及結(jié)構(gòu)
        1.2 干擾素作用機(jī)制
        1.3 干擾素的生物學(xué)活性
        1.4 禽類(lèi)IFN的研究進(jìn)展
    第二章 鵝細(xì)小病毒研究進(jìn)展
        2.1 鵝細(xì)小病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展
        2.2 小鵝瘟免疫防治的研究進(jìn)展
第二篇 研究?jī)?nèi)容
    第一章 吉林白鵝α干擾素成熟肽基因的克隆表達(dá)及抗病毒活性的研究
        1.1 材料與方法
        1.2 結(jié)果
        1.3 討論
        1.4 小結(jié)
    第二章 吉林白鵝γ干擾素基因序列分析、原核表達(dá)及抗病毒活性測(cè)定
        2.1 材料與方法
        2.2 結(jié)果
        2.3 討論
        2.4 小結(jié)
    第三章 吉林白鵝IFN-γ及其與VP3融合基因的真核表達(dá)
        3.1 材料與方法
        3.2 結(jié)果
        3.3 討論
        3.4 小結(jié)
    第四章 JGIFN-VP3真核表達(dá)質(zhì)粒對(duì)雛鵝的免疫研究
        4.1 材料與方法
        4.2 結(jié)果
        4.3 討論
        4.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
中英文縮略語(yǔ)
作者簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]吉林白鵝α干擾素在大腸桿菌中的表達(dá)及抗病毒活性檢測(cè)[J]. 李公美,李玉梅,胡靜濤,劉可越,錢(qián)愛(ài)東.  中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2012(02)
[2]鵝γ-干擾素的原核表達(dá)及抗病毒活性研究[J]. 胡曉靜,劉棋,付薇,徐賢坤,熊毅.  畜牧與獸醫(yī). 2012(02)
[3]Ⅲ型干擾素——新型抗病毒細(xì)胞因子[J]. 楊祎,侯煒.  生命科學(xué). 2011(08)
[4]鵝α干擾素基因在COS-7細(xì)胞中的瞬時(shí)表達(dá)及抗病毒功能初探[J]. 劉菲,唐衛(wèi)杰,程安春,汪銘書(shū),趙婷婷,高麗芹.  浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版). 2011(04)
[5]天府肉鵝IFN-α成熟肽基因的原核表達(dá)及抗病毒活性[J]. 劉菲,高麗芹,程安春,汪銘書(shū),韓清林,趙婷婷,唐衛(wèi)杰,嚴(yán)曉玲.  四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(02)
[6]小鵝瘟病毒VP3真核表達(dá)質(zhì)粒與弱毒疫苗誘導(dǎo)鵝體免疫應(yīng)答的比較[J]. 朱德康,黎敏,車(chē)茜,程安春,汪銘書(shū),陳孝躍.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(03)
[7]天府肉鵝IFN-α基因的克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 劉菲,趙婷婷,程安春,汪銘書(shū),韓清林,高麗芹,唐衛(wèi)杰.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2010(12)
[8]重組獅頭鵝α干擾素的制備及其抗病毒活性[J]. 鄭曉靈,劉艷芬,陳紹紅,劉鈾.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2010(07)
[9]鵝細(xì)小病毒野毒的分離及VP3基因的克隆及序列分析[J]. 李公美,邵洪澤,劉海軍,錢(qián)愛(ài)東.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(04)
[10]鵝細(xì)小病毒VP3基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在Vero細(xì)胞中表達(dá)[J]. 高光,張?chǎng)?徐佳,王淳玉,許洪潔,胡桂學(xué).  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2010(03)

博士論文
[1]天府肉鵝α干擾素基因克隆、表達(dá)及其生物學(xué)活性研究[D]. 劉菲.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]豬α干擾素、豬β干擾素與豬γ干擾素的抗病毒活性及其免疫佐劑的研究[D]. 姚清俠.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[3]雞干擾素與干擾素受體重組蛋白的生物學(xué)特性及其相互作用[D]. 韓春來(lái).中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]豬干擾素α、β、γ基因克隆、原核表達(dá)及其單克隆抗體制備的研究[D]. 王曉杜.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[2]雞γ干擾素基因的克隆和表達(dá)及其多克隆抗體的制備[D]. 丁忠慶.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003



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