剛地弓形蟲(chóng)（Toxoplasma gondii）是一種宿主廣泛的寄生性原蟲(chóng)，能感染包括人類(lèi)在內(nèi)的多種溫血?jiǎng)游铮湟鸬墓蜗x(chóng)�。╰oxoplasmosis）危害嚴(yán)重，對(duì)人類(lèi)健康和畜牧業(yè)生產(chǎn)構(gòu)成很大威脅。弓形蟲(chóng)病有多種傳播途徑，通過(guò)接觸土壤而食入弓形蟲(chóng)卵囊是獲得性感染的主要方式之一。卵囊隨貓糞排入環(huán)境后，隨著雨水沖刷和滲透作用在土壤中散播，進(jìn)一步污染水源，成為弓形蟲(chóng)病的重要傳染源。建立土壤中弓形蟲(chóng)檢測(cè)方法并采集土樣進(jìn)行檢測(cè)，了解土壤中弓形蟲(chóng)的分布情況，可以有效預(yù)防土源性弓形蟲(chóng)病的傳播。從土壤中分離病原體后鏡檢或接種小鼠是以病原學(xué)為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，以PCR為基礎(chǔ)的基因擴(kuò)增技術(shù)因特異性強(qiáng)、敏感性高、檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)已廣泛應(yīng)用于土壤中弓形蟲(chóng)的檢測(cè)。本研究以弓形蟲(chóng)529bp重復(fù)序列為靶基因，設(shè)計(jì)特異性引物，建立了土壤中弓形蟲(chóng)半套式PCR檢測(cè)方法。該方法操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，每克土壤中最低可檢測(cè)到2個(gè)弓形蟲(chóng)卵囊，且與犬新孢子蟲(chóng)、牛微小隱孢子蟲(chóng)、雞貝氏隱孢子蟲(chóng)、莫氏巴貝斯蟲(chóng)、大巴貝斯蟲(chóng)、卵形巴貝斯蟲(chóng)、雙芽巴貝斯蟲(chóng)、中華泰勒蟲(chóng)、牛巴貝斯蟲(chóng)、環(huán)形泰勒蟲(chóng)、牛鏈球菌、豬鏈球菌、蒙氏腸球菌... 

【文章來(lái)源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
英文縮略詞表
目錄
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述與研究?jī)?nèi)容
    1.1 土壤中弓形蟲(chóng)研究現(xiàn)狀
    1.2 弓形蟲(chóng) 529 bp 基因序列的特征及其在研究中的應(yīng)用
    1.3 研究?jī)?nèi)容
第二章 土壤中弓形蟲(chóng)檢測(cè)方法的建立
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 蟲(chóng)株、基因與載體
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 弓形蟲(chóng) RH 株速殖子培養(yǎng)
        2.2.2 弓形蟲(chóng) RH 株卵囊的培養(yǎng)、分離與純化
        2.2.3 弓形蟲(chóng)卵囊基因組 DNA 提取
        2.2.4 引物設(shè)計(jì)
        2.2.5 引物 TX1 與 TX3 退火溫度探索
        2.2.6 引物 TX2 與 TX3 退火溫度探索
        2.2.7 引物 TX1 濃度探索
        2.2.8 模板濃度對(duì)普通 PCR 和半套式 PCR 反應(yīng)的影響
        2.2.9 半套式 PCR 檢測(cè)方法的初步建立
        2.2.10 普通 PCR 反應(yīng)條件的優(yōu)化
        2.2.11 半套式 PCR 反應(yīng)條件的優(yōu)化
        2.2.12 土壤中弓形蟲(chóng)檢測(cè)方法的建立
        2.2.13 構(gòu)建陽(yáng)性重組質(zhì)粒并測(cè)序
        2.2.14 特異性實(shí)驗(yàn)
        2.2.15 敏感性試驗(yàn)
        2.2.16 土壤樣品檢測(cè)試驗(yàn)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 引物 TX1 和 TX3 在不同退火溫度下的擴(kuò)增結(jié)果
        2.3.2 引物 TX2 和 TX3 在不同退火溫度下的擴(kuò)增結(jié)果
        2.3.3 引物 TX1 在不同濃度下的擴(kuò)增結(jié)果
        2.3.4 模板濃度對(duì) PCR 反應(yīng)的影響
        2.3.5 普通 PCR 反應(yīng)條件的優(yōu)化
        2.3.6 半套式 PCR 反應(yīng)條件的優(yōu)化
        2.3.7 重組陽(yáng)性質(zhì)粒 PCR 鑒定結(jié)果
        2.3.8 重組質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果
        2.3.9 反應(yīng)特異性鑒定結(jié)果
        2.3.10 敏感性檢測(cè)結(jié)果
        2.3.11 土壤樣品檢測(cè)結(jié)果
        2.3.12 陽(yáng)性土壤樣品 DNA 測(cè)序結(jié)果
    2.4 討論
第三章 半套式 PCR 檢測(cè)方法在土壤檢測(cè)中的應(yīng)用
    3.1 材料和方法
        3.1.1 試劑
        3.1.2 土壤樣品采集
        3.1.3 土壤中基因組 DNA 提取
        3.1.4 方法
    3.2 結(jié)果
    3.3 討論
第四章 研究結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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