牛病毒性腹瀉/粘膜�。˙ovine Viral Diarrhea/Mucosal Disease，BVD/MD）是由牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrh Virus，BVDV）引起牛的以發(fā)熱、消化道粘膜糜爛、潰瘍、脫落、出血性炎癥、腹瀉、白細(xì)胞下降、繁殖障礙為主要特征的一種傳染病。該病在養(yǎng)牛國家廣泛流行，形成持續(xù)性感染，引起免疫抑制，易導(dǎo)致繼發(fā)感染，給畜牧業(yè)生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，世界各國對(duì)于該病的防控主要通過采取動(dòng)物檢疫、淘汰和免疫接種相結(jié)合的策略。在歐美發(fā)達(dá)國家釆取檢疫和淘汰為主，免疫接種為輔的方法來防控該病，使得該病得到有效控制。然而，我國由于缺乏理想的商品化疫苗和檢測產(chǎn)品，導(dǎo)致該病在我國很多地區(qū)廣泛流行。因此，研發(fā)用于BVD防控的疫苗和檢測試劑，制定并完善BVD的防控體系對(duì)于保障我國養(yǎng)牛業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展具有重要的意義。本研究以BVDV-2SW分離株為研究對(duì)象，對(duì)該病毒E2基因進(jìn)行了克隆，運(yùn)用大腸桿菌和酵母表達(dá)體系表達(dá)E2基因，通過SDS-PAGE和Western blot分析表達(dá)的重組E2蛋白的反應(yīng)原性，選擇表達(dá)量高且反應(yīng)原性強(qiáng)的重組E2蛋白作為ELI... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
導(dǎo)師評(píng)閱表
中文摘要
Abstract
中英文縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
第二章 實(shí)驗(yàn)研究
    實(shí)驗(yàn)一 BVDV E2蛋白基因的克隆及原核表達(dá)研究
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 目的基因的 RT-PCR 擴(kuò)增
            2.2 目的基因 DNA 測序結(jié)果及推導(dǎo)的氨基酸序列分析
            2.3 重組質(zhì)粒的 PCR 鑒定
            2.4 重組表達(dá)載體pET-28a-E2和pET-32a-E2的鑒定
            2.5 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及鑒定
            2.6 E2表達(dá)產(chǎn)物Western blot鑒定
        3 討論
    實(shí)驗(yàn)二 BVDV E2 基因在畢赤酵母中的表達(dá)
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
            2.2 重組質(zhì)粒的 PCR 鑒定
            2.3 陽性轉(zhuǎn)化子的鑒定
            2.4 目的蛋白的 SDS-PAGE 分析
            2.5 目的蛋白的 Western blot 分析
        3 討論
    實(shí)驗(yàn)三 BVDV E2 重組蛋白的純化及間接 ELISA 方法的初步建立
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 重組蛋白的純化
            2.2 抗原最適包被濃度與血清最佳稀釋度的確定
            2.3 最佳封閉液和封閉時(shí)間的選擇
            2.4 酶標(biāo)抗體最佳稀釋濃度和最佳工作時(shí)間的選擇
            2.5 陰陽性臨界值的確定
            2.6 間接ELISA特異性試驗(yàn)結(jié)果
            2.7 間接ELISA敏感性試驗(yàn)結(jié)果
        3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
在學(xué)校期間參與的研究課題
發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]牛病毒性腹瀉病毒基因1型全基因組的測序分析[J]. 何延華,黃新,鐘發(fā)剛,韓猛立,康立超,王新華,薄新文.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2012(03)
[2]牛病毒性腹瀉病活疫苗BVDV2/JZ05-1株毒力返強(qiáng)試驗(yàn)[J]. 李海濤,苗利光,劉艷環(huán),王松,王文昊,安亞雄,馮卓.  特產(chǎn)研究. 2012(01)
[3]牛病毒性腹瀉病毒血清抗體檢測[J]. 王文,張娟,員麗娟,季新成.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(09)
[4]豬源牛病毒性腹瀉病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 鄧宇,張榮,叢雁方,張建武,袁世山,文心田,鄭浩.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(07)
[5]牛病毒性腹瀉-黏膜病病毒斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附檢測法的建立[J]. 張寧,趙月蘭,趙博偉,胡曉悅,呂炳起,劉軍峰.  湖北畜牧獸醫(yī). 2011(05)
[6]豬源牛病毒性腹瀉病毒的分離鑒定[J]. 楊小燕,魏春華,劉建奎,戴愛玲,李曉華.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2011(01)
[7]牛病毒性腹瀉病毒套式RT-PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用[J]. 祖立闖,王金良,李嬌,魏鳳,沈志強(qiáng).  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2010(12)
[8]北京地區(qū)規(guī)�；膛雠２《拘愿篂a病血清學(xué)調(diào)查[J]. 張俊杰,凌宗帥,黃凱,齊長明,馬翀,劉英霞,曹杰.  中國奶牛. 2010(10)
[9]中國牛病毒性腹瀉病毒JZ05-1分離株全基因測序及分析[J]. 李慶超,苗利光,李海濤,劉艷環(huán),張廣雷,肖佳美.  病毒學(xué)報(bào). 2010(03)
[10]重慶市部分地區(qū)牛病毒性腹瀉/粘膜病血清流行病學(xué)調(diào)查[J]. 楊澤林,冉智光,曾政,黃誠,熊仲良,蘇承忠,郭利敏,米自由.  畜牧市場. 2009(10)

碩士論文
[1]基因2型牛病毒性腹瀉病毒的分離、鑒定[D]. 任敏.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3362510