以1日齡SPF雛雞為研究對(duì)象,將60只雛雞隨機(jī)分為REV感染組（I組）和未感染病毒的對(duì)照組（C組）。為探索REV感染對(duì)SPF雛雞免疫器官TLR3及其相關(guān)因子IRF3、NF-κBp65和IFN-βmRNA表達(dá)及其蛋白含量和病毒滴度動(dòng)態(tài)發(fā)展變化,應(yīng)用WB、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、間接ELISA等方法,較全面系統(tǒng)對(duì)REV感染SPF雛雞后,其胸腺、脾臟和法氏囊TLR3介導(dǎo)的抗病毒天然免疫進(jìn)行研究,主要結(jié)果如下:（1）REV感染SPF雛雞后1-28天,在其胸腺組織中檢測(cè)到了REV;病毒感染后1-3天,在脾臟組織中檢測(cè)到了REV;在法氏囊組織中于病毒感染后1-14天檢測(cè)到病毒,其他被檢時(shí)間點(diǎn)未發(fā)現(xiàn)病毒。表明REV感染SPF雛雞后,免疫器官不同病毒存在的時(shí)間長(zhǎng)短也不同。（2）REV感染SPF雛雞后,其胸腺和法氏囊中TLR3 mRNA表達(dá)和蛋白含量于病毒感染后1-7天顯著或極顯著（P<0.05或P<0.01）高于對(duì)照雛雞;IRF3 mRNA表達(dá)和蛋白含量不同程度高于對(duì)照雛雞;NF-κBp65 mRNA表達(dá)于病毒感染后1-3天明顯（P<0.05或P<0.01）高于對(duì)照雛雞,而21-2... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

REV基因組主要核酸序列

20注：1. 陰性對(duì)照 2. 分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 2000 3. LTR PCR 產(chǎn)物Notes：Lane1. Negative Control Lane2. DL2000 MarkerLane3. The product of pMD-18-T -LTR amplification by PCR圖 3-1 重組 pMD-18-T-LTR 質(zhì)粒 PCR 鑒定ure 3-1 Identification of recombinant plasmid pMD-18-T-LTR by 因擴(kuò)增片段序列測(cè)定序，將 LTR 基因片段序列進(jìn)行檢測(cè)，并與 GenBank 已發(fā)表序列，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。因標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制T-LTR 重組質(zhì)粒按 10-1梯度稀釋，將其進(jìn)行 RT-qPCR 擴(kuò)增，得

圖 3-2 pMD-18-T-LTR 陽(yáng)性質(zhì)粒 RT-qPCR 擴(kuò)增曲線Figure 3-2 The amplification curve of pMD-18-T-LTR positive plasmid on RT-qPCR（2）熔解峰 TLR 基因熔解峰圖 3-3 中 RT-qPCR 的產(chǎn)物有單一峰，無(wú)雜峰，表明引物特異性好，擴(kuò)增效率高，熔解溫度為 85±0.5 °C。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]REV感染對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞凋亡及P53表達(dá)的影響[D]. 白玉.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]大蒜素改善禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒感染SPF雞免疫功能的機(jī)制[D]. 王麗媛.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]REV感染對(duì)SPF雛雞免疫器官細(xì)胞凋亡及Bcl-2、C-myc基因表達(dá)的影響[D]. 侯寧.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[4]TLR3與RIG-I相關(guān)信號(hào)分子在鴨呼腸孤病毒感染雛鴨免疫器官中表達(dá)變化研究[D]. 趙赫.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
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