布魯氏菌�。˙rucellosis,簡稱布病）是一種由布魯氏菌（Brucella.spp,簡稱布氏菌）引起的人畜共患傳染病,主要傳染源是牛、羊、豬等家畜,其中羊種菌最易感染人。診斷和預(yù)防是目前控制該病的有效手段,但可以獨(dú)立用于布病的診斷方法不足以完善,間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（iELISA）操作簡單、實(shí)驗(yàn)條件要求低、適合廣泛推廣。隨著布病的廣泛流行,全國絕大部分省市地區(qū)均相繼分離到了布氏菌,而按照布病手冊進(jìn)行鑒定時需要有標(biāo)準(zhǔn)菌株做對照,但又存在致病性高、購買和運(yùn)輸難度大等問題,這對工作人員存在很大的風(fēng)險。布病主要集中爆發(fā)在農(nóng)區(qū)和牧區(qū)這些地區(qū),對其進(jìn)行現(xiàn)場調(diào)查將會對布病的流行及發(fā)展趨勢有進(jìn)一步的了解。為此本研究從診斷方法、生物安全和現(xiàn)場調(diào)查三個方面對布病展開了系統(tǒng)的研究。研究—為了完善布病診斷方法,構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET-30a-omp19,原核表達(dá)并純化了布氏菌Omp19,通過Western-blot驗(yàn)證其抗原性,以該蛋白作為包被抗原,建立檢測羊種布氏菌的iELISA,對其重復(fù)性和敏感性進(jìn)行了評價,通過對180份臨床羊血清樣本進(jìn)行了檢測,并與我國布病診斷標(biāo)準(zhǔn)試管凝集試驗(yàn)（SAT）進(jìn)行了比較,... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

質(zhì)粒PCRt廣増產(chǎn)物電泳圖

圖1 ornp19基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電ectrophoretic profile of PCR productans 2K DNA marker ; 1，2:onipl9 CR鑒定結(jié)果蕩培養(yǎng)后，提取質(zhì)粒，初步證明該表達(dá)質(zhì)粒是M 1 2 3 4 5

且得到的片段大小與質(zhì)粒和目的片段大小一致，推斷為pET-30a載體和基因，證明連接成功，見圖3。M 1隊(duì)圖3重組表達(dá)質(zhì)粒pET-30a-onip19的雙酶切鑒定Fig3 Identification of recombinant plasmid pET-30a-ompl9 by restriction analysis注：M:Trans 2K plus DNA marker ; 1:軍：組質(zhì)粒雙fiS切恭定2. 3. 1.2.4序列分析將重組質(zhì)粒送去測序，測序結(jié)果顯示，插入的基因片段全長534bp，與GenBank中登陸的0/KP79基因序列同源性達(dá)100%，證明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功，見圖4。將測序結(jié)果通過BLAST分析發(fā)現(xiàn)布氏菌不同種屬及部分疫苗株間基因相似性在99%-100%，而在小腸結(jié)腸耶爾森菌0:9中并不存在，相似性比對結(jié)果見表3。說明0mpl9蛋白可作為布病診斷的候選抗原之一。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]布魯氏菌種及種內(nèi)部分生物型快速PCR鑒定方法的建立及應(yīng)用研究[J]. 李振軍,侯雪新,孫渭歌,賈雪,田國忠.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2013 (02)
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[5]我國羊種3型布魯氏菌的多位點(diǎn)序列分型研究[J]. 周曉艷,陳燕芬,崔步云,陳澤良,姜海,趙鴻雁,樸東日,李蘭玉,王金桃.  中國人獸共患病學(xué)報. 2011(05)
[6]2009年全國布魯氏菌病監(jiān)測數(shù)據(jù)分析[J]. 滿騰飛,王大力,崔步云,王贏,丁凡,李鐵鋒,孫輝,魏榮杰,李群,馮子健,殷文武.  疾病監(jiān)測. 2010(12)
[7]布魯氏菌強(qiáng)毒株16M和疫苗株M5差異探索[J]. 趙振祥,趙鴻雁,崔步云,李蘭玉,樸冬日,郝素珍.  中國人獸共患病學(xué)報. 2009(10)
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[9]AMOS-PCR對布魯氏菌種型鑒定的應(yīng)用[J]. 姜海,崔步云,趙鴻雁,樸東日,李蘭玉.  中國人獸共患病學(xué)報. 2009(02)
[10]布魯氏菌多重聚合酶鏈反應(yīng)鑒定研究[J]. 劉國棟,崔步云,劉榮臻,李元凱.  疾病監(jiān)測. 2008(05)

碩士論文
[1]布魯氏菌蛋白質(zhì)文庫的建立及感染與免疫鑒別診斷標(biāo)識抗原的研究[D]. 侯慧玉.中國疾病預(yù)防控制中心 2013
[2]羊布魯氏菌病iELISA抗體檢測方法的建立及布魯氏菌omp28基因的克隆與表達(dá)[D]. 王秀麗.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 2012
[3]布魯氏菌種間差異標(biāo)識蛋白研究[D]. 楊星雅.中國疾病預(yù)防控制中心 2012
[4]布魯氏菌蛋白芯片的研制及抗體譜分析[D]. 徐杰.蘭州大學(xué) 2010
[5]羊種布魯氏菌強(qiáng)毒株16M與疫苗株M5差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析[D]. 張洪麗.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[6]布魯氏菌VirB8-PCR診斷方法的建立與應(yīng)用及Ery基因的克隆與序列分析[D]. 吳冬玲.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號：3359784