本研究以牦牛β-防御素5基因為研究對象，分別對牦牛β-防御素5基因進行原核和真核表達研究。原核表達以pET-32a（+）為表達載體，將構(gòu)建好的重組原核表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）進行表達，檢測其重組蛋白的體外抑菌活性。真核表達以奶牛β-酪蛋白基因（β-casein，CSN2）5’端和3’端為調(diào)控成分，牦牛β-防御素5基因CDS區(qū)為表達序列，構(gòu)建牦牛β-防御素5基因乳腺特異性表達載體，將表達載體導(dǎo)入體外培養(yǎng)的牦牛乳腺上皮細(xì)胞，分析牦牛β-防御素5基因的表達效率。具體如下：1.采用RT-PCR方法從牦牛肺組織中擴增牦牛BNBD5基因成熟肽編碼區(qū)及BNBD5基因開放閱讀框。PCR產(chǎn)物經(jīng)膠回收純化后，克隆于pMD19-T載體的T位點。測序結(jié)果表明，獲得了138bp的BNBD5成熟肽編碼片段及219bp的開放閱讀框，成熟肽編碼45個氨基酸殘基，內(nèi)含6個位置保守的半胱氨酸殘基。經(jīng)遺傳進化分析發(fā)現(xiàn)，該基因的序列與牛的mRNA同源性最高，可達到86.2%。2.將重組表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，于37°C06h間進行誘導(dǎo)表達，SDS-PAGE檢測融合蛋白表達情況，并對該重組蛋白進行純化測定其... 

【文章來源】：西南民族大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

牦牛肺組織總RNA電泳圖

牦牛BNBD5成熟肽的測序結(jié)果及氨基酸序列

牦牛與其他物種的BNBD5基因系統(tǒng)進化樹分析

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3356510