發(fā)布時間：2021-08-20 16:16

　　自2010年以來，豬流行性腹瀉在東南亞國家爆發(fā)，哺乳仔豬呈高發(fā)病率、高死亡率，經(jīng)濟損失嚴重。目前東南亞、德國及美國都有PED爆發(fā)的報道。在發(fā)生流行性腹瀉的豬群中，豬傳染性胃腸炎病毒也有相當高的檢出率。對中國流行性腹瀉病毒的基因水平研究顯示，引起此次流行性腹瀉暴發(fā)的毒株與我國長期使用的豬流行腹瀉疫苗株XXX株有較大差異，尤其是纖突（S）蛋白的N端。此外，XXX株疫苗免疫豬群中依然發(fā)生豬流行性腹瀉，提示現(xiàn)有疫苗不能給豬群提供完全免疫保護。本論文原核表達豬流行腹瀉病毒中國分離株A/C的S基因N端高變區(qū)，并將純化的S蛋白融合到基于XXX株疫苗株的豬傳染性胃腸炎-豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗，對所制備二聯(lián)苗的免疫原性進行了研究，為進一步研制有效防控豬流行性腹瀉流行株引起的腹瀉和豬傳染性胃腸炎的高效疫苗奠定基礎。1. PEDV間接ELISA抗體檢測方法的建立將表達PEDV XXX株疫苗株S基因N端1077bp（YSA）的PET-28a重組陽性菌在37℃的條件下加入IPTG進行誘導表達，經(jīng)SDS-PAGE分析表明該蛋白獲得了高效表達，表達的蛋白為42KD，且主要以融合蛋白的形式表達。Western bl... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學河南省

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒在BL21中的表達、目的蛋白的純化

圖 2 PEDV 在 Vero 細胞上的病毒滴度動態(tài)曲線igure 2 The dynamic curves of virus titers of PEDV in Vero cells以看出，按 XXX 接毒時，細胞長滿單層時在 48 小時收毒時病毒滴度稍高于90%時接毒，在細胞長滿單層接毒時，按 XXX 接毒時病毒滴度稍高于按 XXXV 增殖條件為在細胞長滿單層時按 XXX 時接毒。收獲的 PEDV 病毒含量為化結(jié)果體的洗滌及純化，能獲得較純的無標簽的 SA 蛋白，用于疫苗的制備（見圖滅活效果的檢驗豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉病毒液病分別接種于 PK-15 細胞和 Vero 細，無細胞病變，說明病毒滅活徹底。檢驗2 結(jié)果

圖 3 LSA 蛋白表達純化結(jié)果M.低分子量蛋白 Marker，1.未經(jīng)誘導的含空質(zhì) BL21 菌，2.誘導的含空質(zhì)粒 BL21 菌，3.未經(jīng)誘導的含重組4. 誘導的含重組質(zhì)粒 BL21 菌，5.經(jīng)鎳柱純化的 LSA 蛋白Figure 3 SDS-PAGE of recombinant protein expression：Protein molecμLar weight Marker; lane1.pBV220-LSA/BL21 induced by IPTG; lane 2not induced by IPTG; lane 3. purified purified recombinant LSA prote5.1.4 黏度檢驗 用 1 mL 吸管（下口內(nèi)徑為 1.2 mm，上口內(nèi)徑為 2.7右的疫苗，令其垂直自然流出，流出 0.4 mL 所需時間未超過 4 s。5.2 無菌檢驗 按《中國獸藥典》進行無菌檢驗，結(jié)果制備的疫苗無雜沒有菌落生長。5.3 疫苗的小鼠安全性試驗制備的豬傳染性胃腸炎-豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗免疫小鼠后，觀

【參考文獻】：
期刊論文
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