鐵蛋白是在真核生物中儲存鐵的可溶性組織蛋白,主要由兩種亞基構(gòu)成：重鏈蛋白與輕鏈蛋白。重鏈蛋白上含有亞鐵氧化酶活性位點（ferroxidase center）,能參與鐵的吸收和釋放,是鐵蛋白的主要功能元件。重鏈蛋白由鐵蛋白重鏈多肽1（ferritin heavy chain polypeptide1,FTH1）基因編碼,其基因表達在轉(zhuǎn)錄水平上和轉(zhuǎn)錄后都有調(diào)控,而轉(zhuǎn)錄后調(diào)控是由鐵調(diào)節(jié)蛋白介導(dǎo)的。鐵蛋白主要參與鐵的代謝和調(diào)節(jié),而最新研究發(fā)現(xiàn)它也具有許多與鐵調(diào)節(jié)不相關(guān)的功能。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)鐵蛋白與疾病密切相關(guān),例如肝炎、糖尿病、腫瘤、白血病等。也有報道表明鐵蛋白參與脊椎動物的先天性免疫。本課題組通過抑制性消減雜交技術(shù)篩選雛鴨肝炎病毒侵染下的差異表達基因,發(fā)現(xiàn)FTH1基因是鴨肝炎病毒感染過程中的關(guān)鍵候選基因之一本研究克隆了金定鴨FTH1基因編碼區(qū)（CDS區(qū)）序列,采用qRT-PCR技術(shù)檢測了FTH1在不同組織中的表達情況,并分析了感染雛鴨肝炎病毒（DHV-1）后FTH1基因和Caspase-3等凋亡相關(guān)基因表達量的變化,旨在找出FTH1基因與DHV-1感染雛鴨的內(nèi)在聯(lián)系。為進一步探究鴨中FT... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號說明
1 文獻綜述
    1.1 鐵蛋白的研究進展
        1.1.1 鐵蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 鐵蛋白參與調(diào)節(jié)鐵代謝
        1.1.3 鐵蛋白的表達調(diào)控
        1.1.4 鐵蛋白與疾病的研究現(xiàn)狀
    1.2 RNA干擾的研究進展
        1.2.1 RNA干擾的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 RNA干擾的作用機制
        1.2.3 RNA干擾的特點
        1.2.4 siRNA的制備
        1.2.5 慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾
        1.2.6 RNA干擾的應(yīng)用
    1.3 本研究的目的、意義
2 鴨FTH1基因的克隆及表達的初步分析
    2.1 實驗材料及試劑
    2.2 主要試驗儀器設(shè)備
    2.3 實驗方法及步驟
        2.3.1 鴨組織總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.3.2 PCR引物的設(shè)計及合成
        2.3.3 鴨FTH1基因CDS區(qū)的克隆與測序
        2.3.4 序列分析
        2.3.5 鴨FTH1基因組織表達譜分析
        2.3.6 DHV-1感染對FTH1基因表達的影響
        2.3.7 感染DHV-1對組織中凋亡相關(guān)基因表達影響
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 鴨FTH1基因CDS區(qū)的克隆
        2.4.2 FTH1基因CDS區(qū)序列分析
        2.4.3 FTH1基因組織表達譜分析
        2.4.4 DHV-1感染對FTH1基因表達的影響
        2.4.5 DHV-1感染后組織中凋亡相關(guān)基因mRNA的表達變化
    2.5 討論
        2.5.1 FTH1基因CDS區(qū)的克隆及序列分析
        2.5.2 鴨FTH1的組織表達分析
        2.5.3 DHV-1感染對組織中FTH1與凋亡相關(guān)基因表達的影響
3 FTH1基因功能初步鑒定
    3.1 實驗材料及試劑
    3.2 主要試驗儀器設(shè)備
    3.3 實驗方法及步驟
        3.3.1 pEGFP-C1-FTH1過表達載體的構(gòu)建及功能初步分析
        3.3.2 pGLVH1/GFP+Puro-FTH1干擾載體的構(gòu)建及功能初步分析
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 pEGFP-C1-FTH1重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定
        3.4.2 鴨胚成纖維細胞的形態(tài)特征
        3.4.3 熒光顯微鏡下重組質(zhì)粒在DEF中的表達
        3.4.4 熒光定量檢測相關(guān)基因的表達變化
        3.4.5 熒光顯微鏡下慢病毒載體在DEF中的表達
        3.4.6 干擾質(zhì)粒的篩選
        3.4.7 FTH1抑制后凋亡相關(guān)基因的表達變化
    3.5 討論
        3.5.1 pEGFP-C1-FTH1過表達載體的構(gòu)建及鑒定
        3.5.2 RNAi載體的構(gòu)建及干擾效果的鑒定
        3.5.3 過表達或干擾FTH1后對凋亡相關(guān)基因表達的影響
4 全文結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章


【參考文獻】：
期刊論文
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[6]乙型肝炎肝硬化患者血清鐵和鐵蛋白水平與脂質(zhì)過氧化損傷的相關(guān)性研究[J]. 李強,陳明,汪莉萍,潘修成,李智勇.  實用肝臟病雜志. 2009(01)
[7]血清鐵蛋白與2型糖尿病關(guān)系的研究[J]. 韓立坤,盧丹.  中國實驗診斷學(xué). 2007(10)
[8]甲胎蛋白與血清鐵蛋白聯(lián)合檢測在慢性乙型重癥肝炎中的臨床意義[J]. 馮紅萍.  現(xiàn)代診斷與治療. 2007(04)
[9]血清鐵蛋白測定在肝損傷中的臨床意義[J]. 夏吉榮.  重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2003(06)
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碩士論文
[1]DHV-1感染過程中凋亡相關(guān)基因的表達[D]. 盛曉丹.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號：3352451