豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）衣殼蛋白（Cap）是研制基因工程疫苗和血清抗體檢測(cè)方法的主要候選抗原。為篩選免疫原性強(qiáng)的Cap抗原表位,將定位在Cap上的6個(gè)B細(xì)胞線性表位的編碼基因序列重新組合,命名為R1234、R1235、R1236、R2345、R2346和R3456,然后克隆至pET32a原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化到大腸埃希菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。通過對(duì)表達(dá)和純化條件的優(yōu)化,最終獲得6個(gè)多抗原表位串聯(lián)體的重組蛋白。Western blot和間接ELISA結(jié)果顯示,6組重組表位蛋白均能被PCV-2陽性血清特異性識(shí)別,具有良好的反應(yīng)原性。將其與完整Cap分別免疫Balb/c小鼠,檢測(cè)免疫后血清中特異性抗體和細(xì)胞因子水平以及脾臟淋巴細(xì)胞中CD4⁺和CD8⁺T淋巴細(xì)胞的比例。結(jié)果表明,R2346組合刺激機(jī)體產(chǎn)生的特異性抗體和細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4的水平明顯高于其他組,脾臟淋巴細(xì)胞中CD4⁺和CD8⁺T淋巴細(xì)胞含量與對(duì)照組相比顯著增加（P<0.05）,說明該重組蛋白能夠刺激體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)。因此,篩選獲... 

【文章來源】：動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,41(03)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

SDS-PAGE鑒定PCV-2 Cap重組表位蛋白表達(dá)結(jié)果

IFN-γ由主要由T淋巴細(xì)胞和天然殺傷細(xì)胞分泌,在細(xì)胞的免疫應(yīng)答方面發(fā)揮重要作用;IL-4則由Th2細(xì)胞分泌,輔助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體,參與機(jī)體的體液應(yīng)答反應(yīng)。檢測(cè)兩者的含量可以反映機(jī)體受到抗原刺激后免疫應(yīng)答水平。本試驗(yàn)通過對(duì)免疫后35 d血清中IFN-γ和IL-4檢測(cè)的結(jié)果表明,R2346組誘導(dǎo)產(chǎn)生的2種細(xì)胞因子水平顯著高于對(duì)照組,其他試驗(yàn)組無明顯差異(圖7)。圖3 間接ELISA方法檢測(cè)PCV-2 Cap重組表位蛋白反應(yīng)原性

間接ELISA方法檢測(cè)PCV-2 Cap重組表位蛋白反應(yīng)原性

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]B細(xì)胞表位作圖研究進(jìn)展[J]. 朱睿,李震,董世娟,于瑞嵩,朱于敏.  微生物學(xué)通報(bào). 2017(09)
[2]抗人大腸癌雙價(jià)單鏈抗體基因的構(gòu)建及表達(dá)[J]. 嚴(yán)丹丹,楊福輝,方瑾.  世界華人消化雜志. 2006(24)



本文編號(hào)：3352289