發(fā)布時間：2021-08-19 17:00

　　本試驗以甘肅高山細(xì)毛羊、藏綿羊、灘羊、塔什庫爾干羊、哈薩克羊和湖羊共6個綿羊群體為研究對象,克隆測定藏綿羊PHD2基因CDS序列并對其進行生物信息學(xué)分析;采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測PHD2基因mRNA在綿羊十二指腸等13個組織中的相對表達(dá)量。運用PCR-SSCP技術(shù)分析6個綿羊群體中PHD2基因的遺傳多態(tài)性,以探討藏綿羊PHD2基因遺傳特異性,豐富藏綿羊高原低氧適應(yīng)候選基因的研究基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。主要研究結(jié)果及結(jié)論如下:（1）本試驗經(jīng)克隆測序獲得藏綿羊PHD2基因CDS序列,序列長2609bp,編碼358個氨基酸殘基;與Ensemble數(shù)據(jù)庫中綿羊序列比對發(fā)現(xiàn)2個SNPs,均為同義突變。蛋白分子式為C1691H2674N496O514S12,分子量為38561.5,理論等電點（PI）為8.64。該蛋白由線粒體合成,為親水性蛋白和穩(wěn)定蛋白。預(yù)測分析發(fā)現(xiàn)藏綿羊PHD2蛋白無信號肽剪切位點和跨膜螺旋結(jié)構(gòu),存在兩個低復(fù)雜度區(qū)域和三個結(jié)構(gòu)域。該蛋白翻譯后修飾的主要方式是磷酸化,在細(xì)胞內(nèi)主要行翻譯、氨基酸生物合成、中央中介代謝、調(diào)節(jié)功能、復(fù)制和轉(zhuǎn)錄和脂肪酸代謝作用,且以連接酶的形式在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮底物合成... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Summary
第一章 文獻綜述
    1 高原低氧適應(yīng)性進化
        1.1 生理生化、形態(tài)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞代謝等的適應(yīng)性進化特征
        1.2 分子水平適應(yīng)進化
    2 脯氨酸羥化酶概述
        2.1 PHDs家族概述
        2.2 PHDs的類型和分布
        2.3 染色體定位及基因結(jié)構(gòu)
        2.4 PHDs家族的工作機制
        2.5 PHDs家族的生物學(xué)功能
    3 PHD2基因及其研究進展
        3.1 PHD2基因的結(jié)構(gòu)特點及表達(dá)調(diào)控
        3.2 PHD2基因多態(tài)性和表達(dá)研究
        3.3 PHD2基因在高原低氧適應(yīng)中的研究進展
    4 本研究的目的和意義
第二章 試驗材料與研究方法
    1 試驗材料
        1.1 血樣、組織樣采集
        1.2 主要試劑、儀器設(shè)備和主要溶劑配制
    2 試驗方法
        2.1 DNA的提取和檢測
        2.2 總RNA的提取和檢測
        2.3 cDNA合成
        2.4 引物設(shè)計與擴增
        2.5 擴增產(chǎn)物瓊脂糖檢測
        2.6 擴增產(chǎn)物SSCP檢測
        2.7 基因克隆與測序
    3 數(shù)據(jù)分析方法
        3.1 生物信息學(xué)分析方法
        3.2 實時熒光定量數(shù)據(jù)分析方法
        3.3 基因多態(tài)性分析方法
第三章 結(jié)果與分析
    1 藏綿羊PHD2基因生物信息學(xué)分析
        1.1 藏綿羊PHD2基因PCR擴增結(jié)果
        1.2 藏綿羊擴增序列比對
        1.3 藏綿羊PHD2蛋白理化性質(zhì)分析
        1.4 亞細(xì)胞定位
        1.5 信號肽剪切位點預(yù)測
        1.6 跨膜螺旋結(jié)構(gòu)預(yù)測
        1.7 磷酸化和糖基化位點預(yù)測
        1.8 保守結(jié)構(gòu)域分析
        1.9 親疏水性分析
        1.10 功能預(yù)測與分析
        1.11 二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)預(yù)測分析
    2 綿羊PHD2基因各組織表達(dá)差異
        2.1 總RNA提取瓊脂糖電泳質(zhì)量檢測
        2.2 目的基因PCR產(chǎn)物瓊脂糖電泳檢測
        2.3 目的基因RT-qPCR動力學(xué)曲線分析
        2.4 目的基因RT-qPCR溶解曲線分析
        2.5 目的基因在綿羊不同組織中的表達(dá)分析
    3 綿羊PHD2基因多態(tài)性遺傳特征
        3.1 PCR擴增檢測
        3.2 SSCP檢測
        3.3 等位基因序列比對
        3.4 群體遺傳特性分析
第四章 討論
    1 藏綿羊PHD2基因生物信息學(xué)特征
    2 綿羊PHD2基因mRNA表達(dá)差異
    3 綿羊PHD2基因變異特征
第五章 結(jié)論
參考文獻
附件
致謝
作者簡介
導(dǎo)師簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Expression and effect of proline hydroxylase domain 2 in retina of diabetic rats[J]. Zhen Li,Yi-Qiao Xing,Wei Cui,Qiang Lu.  International Journal of Ophthalmology. 2016(03)
[2]肝細(xì)胞癌中脯氨酸羥化酶1、2、3的表達(dá)及其臨床意義[J]. 林巧妹,王偉林.  中國老年學(xué)雜志. 2015(23)
[3]慢性高原病及高原健康人血清干細(xì)胞因子水平變化的研究[J]. 蘇娟,柴克霞,李占全,崔森,冀林華,陳媛清,楊潔,秦雅婧.  高原醫(yī)學(xué)雜志. 2015(03)
[4]eNOS和NADPH氧化酶在慢性缺氧條件下小鼠肺組織中表達(dá)關(guān)系的研究[J]. 吳西玲,杜立中,徐雪峰.  中國當(dāng)代兒科雜志. 2015(09)
[5]高原動物的低氧適應(yīng)性研究進展[J]. 董傳豪,饒開晴,徐亞歐,于雷.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2015(17)
[6]世居不同高海拔藏族EGLN1多態(tài)與海拔水平的關(guān)聯(lián)研究[J]. 王博洋,巴桑卓瑪,李蕾,央拉,劉蘭,崔超英,龔嘎蘭孜,尼瑪玉珍,多吉,王笑峰,金力.  復(fù)旦學(xué)報(自然科學(xué)版). 2015(04)
[7]ACE基因插入/缺失多態(tài)性與腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)及相關(guān)心血管疾病的關(guān)系研究進展[J]. 于彥彥,董天葳,隋小芳,彭鵬,楊軍.  中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2015(07)
[8]藏驢的血液生理學(xué)特性研究[J]. 韓旭,萬寶云,孔小艷,李濟中,劉興勇,王雪艷,江炎庭,楊舒黎,楊建發(fā),嚴(yán)達(dá)偉.  經(jīng)濟動物學(xué)報. 2015(01)
[9]NOS在側(cè)支血管生長中對血管VE-cadherin表達(dá)及通透性的影響[J]. 楊光,金春子.  中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志. 2015(04)
[10]缺氧誘導(dǎo)因子1調(diào)控缺氧性肺動脈高壓的研究進展[J]. 劉洪濤,曾艷,茍德明.  中華高血壓雜志. 2014(07)

博士論文
[1]藏豬高海拔環(huán)境適應(yīng)性分子機制探討[D]. 董坤哲.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2015
[2]雞胚胎低氧適應(yīng)表型及心臟組織差異表達(dá)基因鑒定[D]. 茍文鈺.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]ACE、HIF1AN、EGLN1基因多態(tài)性與急性高原病的相關(guān)性研究[D]. 張恩浩.第三軍醫(yī)大學(xué) 2015
[4]高原鼠兔對缺氧、寒冷極端高原環(huán)境適應(yīng)的分子機制研究[D]. 白振忠.青海大學(xué) 2015
[5]低氧/低硒對肉雞肺臟內(nèi)皮素-1和其受體基因表達(dá)的影響[D]. 高建峰.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[6]肌紅蛋白在藏羚羊心肌和骨骼肌低氧適應(yīng)中的作用[D]. 馬蘭.青海大學(xué) 2014
[7]藏族低氧適應(yīng)與遺傳多態(tài)性的相關(guān)性研究[D]. 李騫.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2013
[8]NO/NOS在側(cè)支血管生長中對血管VE-cadherin表達(dá)及通透性的影響[D]. 楊寶林.中南大學(xué) 2013
[9]PHD2對結(jié)腸癌細(xì)胞糖酵解活性的調(diào)控作用及分子機制研究[D]. 謝贛豐.第三軍醫(yī)大學(xué) 2012
[10]線粒體基因組與高原習(xí)服適應(yīng)相關(guān)性的初步研究[D]. 羅勇軍.第三軍醫(yī)大學(xué) 2008

碩士論文
[1]PHD2表達(dá)與胃癌性促纖維反應(yīng)的相關(guān)性研究[D]. 簡立輝.福建醫(yī)科大學(xué) 2014
[2]缺氧誘導(dǎo)因子1α及其調(diào)控因子在缺氧性肺動脈高壓新生大鼠肺組織的蛋白質(zhì)表達(dá)研究[D]. 曹靜.新疆醫(yī)科大學(xué) 2014
[3]HIF-1α與脯氨酸羥化酶PHD1、PHD2、PHD3在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及其臨床意義[D]. 林巧妹.浙江大學(xué) 2014
[4]EGLN1基因rs479200和rs480902位點多態(tài)性與藏族人群HGB關(guān)系的研究[D]. 呂坡.遼寧醫(yī)學(xué)院 2013



本文編號：3351793