腦心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）是一種能引起急性傳染病的人畜共患病原體,主要引起人和動(dòng)物發(fā)生腦炎、心肌炎及心肌周圍炎,一般人感染EMCV后,出現(xiàn)嘔吐、頭疼、發(fā)熱、精神不振、頸部僵硬等癥狀,嚴(yán)重的可引起孕婦流產(chǎn)、胎兒畸形或者死亡等,但目前,尚未有較好的早期診斷和防治措施。為此,本研究采用抗人IgM（μ鏈）抗體捕獲人EMCV IgM,建立了IgM ELISA檢測(cè)方法,為EMCV早期臨床診斷提供了技術(shù)保證。本研究通過(guò)PEG-6000濃縮和密度梯度離心對(duì)Vero擴(kuò)大培養(yǎng)的EMCV進(jìn)行分離純化、經(jīng)熱滅活厲,進(jìn)行辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記,初步建立人EMCVIgM捕獲ELISA方法,篩選出陰、陽(yáng)性血清,通過(guò)病毒終點(diǎn)法中和試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證陰、陽(yáng)性血清作為質(zhì)控品；然后對(duì)初建的各條件進(jìn)行優(yōu)化,并對(duì)該法的靈敏度、精密性、特異性和穩(wěn)定性進(jìn)行驗(yàn)證；最后應(yīng)用立的方法對(duì)1077份臨床樣本進(jìn)行了EMCV IgM檢測(cè)；用間接ELISA法進(jìn)行符合驗(yàn)證。結(jié)果：EMCV致Vero細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞病變（CPE）,TCID50=10-5.75/0.1mL,PCR檢測(cè)后符合預(yù)期H標(biāo)；擴(kuò)增EM... 

【文章來(lái)源】：西北民族大學(xué)甘肅省

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

人IgM^鏈的基因及表達(dá)圖

。A> 1 “、I圖1.1庶糖密度梯度制備閣Fig 1.1. Sucrose density gradient preparation of plans第二天，緩慢加入濃縮樣本液T頂層，4°c, 41000ipm/miii離心4h，按500)iL為一個(gè)積分取樣，之后紫外分光光度計(jì)測(cè)定D259nm值。2.2.3 EMGV毒價(jià)測(cè)定觀察已鋪的96孔板細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，當(dāng)達(dá)到90%左右時(shí)，即可接毒。用無(wú)血清DMEM稀釋EMCV(VR-129B株)備用，用無(wú)血清DMEM清洗96孔板3次

圖1.2 Vero細(xì)胞病變結(jié)果(lOx)Fig 1.2 Lesions of african green monkey kidney ceilsA組：空白組;AO、A4、A7分別為在0、4、7天觀察結(jié)果B組：接毒組:AO、A4、A7分別為在0、4、7天觀察結(jié)果Group A: Blank group; AO, A4, A7 respectively at 0, 4，7d observationsGroup B: Group b\ poison; AO, A4. A7 respectively at ()? 4. 7<J observations

【參考文獻(xiàn)】：
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