禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥（Reticuloendotheliosis）是由C型逆轉(zhuǎn)錄病毒禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）引起的一系列癥狀的總稱,主要包括矮小綜合征、急性網(wǎng)狀細(xì)胞瘤和慢性組織腫瘤;其病原是目前己知的家禽中第三種腫瘤病病原。目前用于REV檢測(cè)的方法雖然靈敏度高、準(zhǔn)確性強(qiáng),但耗時(shí)長(zhǎng),需要專業(yè)人員和專業(yè)設(shè)備,基層推廣條件不理想。為此,需要一種簡(jiǎn)便快捷的檢測(cè)方法來(lái)檢測(cè)REV。本論文設(shè)計(jì)研制了一種以檢測(cè)REV主要免疫原性蛋白p30的兩種單抗,REVp30-2C8、REVp30-5G6為基礎(chǔ)的免疫膠體金層析試紙條,具有良好的特異性,靈敏度和ELISA試劑盒相當(dāng),且快速、靈敏、準(zhǔn)確,5-15min即可出結(jié)果;檢測(cè)樣本涵蓋肛拭子、喉拭子等,采樣方便,不需專業(yè)設(shè)備;成本低廉且具有良好的基層推廣價(jià)值,在生產(chǎn)實(shí)際中將產(chǎn)生重要作用。1.兩種單克隆抗體與膠體金結(jié)合條件的選擇本研究參考Frens控制還原劑量以控制膠體金粒徑大小的方法,成功制備了粒徑為15nm、30nm、40nm的膠體金,通過肉眼觀察,透射電鏡,膠體金試驗(yàn)的方法鑒定其適用性。而后,... 

【文章來(lái)源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＲＥＶ病毒結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇ．ｌ?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?Ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ?ｖｉｒｕｓ??

圖２?ＲＥＶ基因組??Ｆｉｇ．２?Ｇｅｎｏｍｅ?ｏｆ?Ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ?ｖｉｒｕｓ??根據(jù)ＲＥＶ病毒的復(fù)制特點(diǎn)，病毒被分為完全復(fù)制型和缺陷型兩種病毒群［１８］。完全復(fù)??制型基因組全長(zhǎng)約９．０ｋｂ［１９］，兩端為長(zhǎng)末端重復(fù)序列（ｌｏｎｇ?ｔｅｒｍｉｎａｌ?ｒｅｐｅａｔ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ，?ＬＴＲ），??從５’端到３’端含有ＰＢＳ引物結(jié)合區(qū)、ｇａｇ、ｐｏ／和ｅ？ｖ等結(jié)構(gòu)基因卿。而ＲＥＶ－Ｔ株作為缺??陷型（不完全復(fù)制型）的基因組長(zhǎng)度僅約５．７ｋｂｔ２ｌｌ?ｇａｇ－ｐｏ／部分大段缺失，部分少量??缺失因此需要輔助病毒ＲＥＶ－Ａ的參與才能進(jìn)行病毒復(fù)制％。缺陷型ＲＥＶ病毒在ｅ？ｖ??區(qū)含有一個(gè)大小約〇．８￣１．５ｋｂ的替代片段，稱為Ｖ－ｒｅｌ基因［２４］，其編碼產(chǎn)物很可能是Ｔ株的??致瘤性蛋白，具有轉(zhuǎn)化宿主淋巴細(xì)胞的能力。其他完全復(fù)制型ＲＥＶ基因組不包含Ｖ－ｒｅｌ片??段，故而只有缺陷型病毒才會(huì)引起急性腫瘤誘發(fā)大規(guī)模死亡［２５］。??１．４蛋白組成??

圖３雙電子層環(huán)繞的膠體金顆粒??Ｆｉｇ．３?Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ?ｇｏｌｄ?ｐａｒｔｉｃｌｅ?ｗｒａｐｐｅｄ?ｂｙ?ｄｏｕｂｌｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｌａｙｅｒ??記過程即標(biāo)記物蛋白質(zhì)等與膠體金顆粒發(fā)生吸附的過程。體結(jié)合過程中存在三種不同的作用力，靜電引力、疏水顆粒與蛋白質(zhì)上的正電位氨基發(fā)生反應(yīng)，蛋白質(zhì)中的半生成配位鍵。第二步蛋白質(zhì)疏水吸附到金顆粒表面。膠蛋白質(zhì)親水基團(tuán)與疏水性膠體相互吸引結(jié)合使其達(dá)到配荷引力降低。當(dāng)ｐＨ值調(diào)節(jié)至適當(dāng)界限時(shí)，蛋白質(zhì)電荷為因靜電引力聚集，在蛋白質(zhì)親水作用和膠體金顆粒疏水質(zhì)結(jié)合。蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)與膠體金的結(jié)合主要是物。結(jié)合后需加入包括牛血清蛋白（ＢＳＡ）、聚乙二醇（Ｐ未被占據(jù)的位點(diǎn)以減少非特異性反應(yīng)，穩(wěn)定膠體金懸膠


本文編號(hào)：3346916