α-倒捻子素是一種天然中藥成分,具有抗氧化、抗炎和抗腫瘤的作用。脂多糖（LPS）作為革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要成分可以引起多種炎癥。本論文中用LPS刺激大鼠腸上皮細(xì)胞（IEC-6細(xì)胞）構(gòu)建炎癥模型,探討了α-倒捻子素的抗炎作用及其潛在的分子機(jī)制。試驗(yàn)一:利用LPS作為刺激物建立IEC-6細(xì)胞炎癥模型,通過CCK-8法檢測細(xì)胞活力、倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡狀況。結(jié)果表明:LPS刺激IEC-6細(xì)胞引起損傷的最佳作用劑量和時(shí)間為10μg/mL,24 h,在此模型條件下,細(xì)胞活力降低、細(xì)胞形態(tài)改變、細(xì)胞凋亡率升高（P<0.05）。試驗(yàn)二:采用CCK-8法篩選α-倒捻子素的作用濃度、倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡狀況。結(jié)果表明:低、中、高濃度分別為2.5、5、10μM的α-倒捻子素預(yù)處理細(xì)胞,能夠顯著降低LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷程度、降低細(xì)胞凋亡率（P<0.05）。試驗(yàn)三:ELISA檢測細(xì)胞上清中PGE2、IL-6、TNF-α和IL-1β的含量,格里斯（Griess）試劑檢測NO分泌,qPCR檢測炎癥因子iNOS、COX-2、IL-6、TNF-... 

【文章來源】：北京農(nóng)學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CCK-8檢測不同濃度的LPS和α-倒捻子素處理后IEC-6細(xì)胞活力注：數(shù)據(jù)是三個獨(dú)立樣本的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，不同字母代表差異顯著P<0.05

北京農(nóng)學(xué)院碩士學(xué)位論文 實(shí)驗(yàn)研究3.3 α-倒捻子素對 LPS 引起的 IEC-6 細(xì)胞形態(tài)的影響為了檢測 LPS 對 IEC-6 細(xì)胞的損傷作用，以及 α-倒捻子素對細(xì)胞的保護(hù)作用，觀察了10 μg/ml 的 LPS 刺激 24 h 和不同濃度的 α-倒捻子素（2.5、5、10 μM）預(yù)處理 1 h 后 IEC-6細(xì)胞的形態(tài)變化。結(jié)果顯示，對照組細(xì)胞形態(tài)有規(guī)則、貼壁生長、呈鋪路石狀，幾乎沒有變圓脫壁死亡的細(xì)胞（圖 2 A）；10 μg/ml 的 LPS 刺激 24 h 后，IEC-6 細(xì)胞排列雜亂無章，有大量的細(xì)胞變圓、皺縮、死亡細(xì)胞數(shù)明顯增加（圖 2 B）；而不同濃度的 α-倒捻子素（2.5、5、10 μM）預(yù)處理后，可以看出 2.5 μM 的 α-倒捻子素即可明顯改善細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞排列明顯有規(guī)則，皺縮和變圓死亡的細(xì)胞數(shù)目明顯減少，5 和 10 μM 的 α-倒捻子素對 LPS 刺激引起的 IEC-6 細(xì)胞形態(tài)改變的影響更為明顯，并且隨著 α-倒捻子素濃度的增加，變形死亡的細(xì)胞數(shù)目越來越少（圖 2 C、D、E）。

北京農(nóng)學(xué)院碩士學(xué)位論文 實(shí)驗(yàn)研究同濃度的 α-倒捻子素（2.5、5、10 μM）預(yù)處理后，與 LPS 組相比早期凋亡和晚期凋亡的細(xì)胞數(shù)目明顯減少（P < 0.05），與對照組沒有顯著差異（P > 0.05），隨著的 α-倒捻子素濃度的增加，細(xì)胞凋亡總數(shù)逐漸降低（圖 3 C、D、E），但是不同濃度的 α-倒捻子素預(yù)處理后引起的細(xì)胞凋亡的總數(shù)之間也沒有顯著差異（P > 0.05）（圖 3F）。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3344620