豬瘟（Classical swine fever, CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus, CSFV）引起豬的一種急性、發(fā)熱、接觸性病毒性傳染病,具有較高的發(fā)病率和死亡率。國(guó)際獸疫局（Office International Des Epizooties, OIE）把其規(guī)定為為必須上報(bào)的A類動(dòng)物傳染病。體外細(xì)胞培養(yǎng)的豬瘟病毒增殖滴度不高,但是目前研究?jī)A向認(rèn)為豬瘟病毒（CSFV）的非結(jié)構(gòu)蛋白NS3是致細(xì)胞病變作用（CPE）的關(guān)鍵,細(xì)胞內(nèi)NS3蛋白的量與細(xì)胞出現(xiàn)CPE之間存在著相關(guān)性,同時(shí)豬瘟NS3蛋白可以不需要豬瘟病毒其他蛋白的參與,具有直接造成宿主細(xì)胞發(fā)生病變的能力,但較低的蛋白存在水平并不能對(duì)宿主細(xì)胞造成可檢測(cè)的損傷。NS3是病毒致病性的標(biāo)志,并且與CSFV對(duì)于豬腎細(xì)胞（PK-15）的致病性有關(guān)。為了闡明CSFV NS3蛋白與宿主細(xì)胞蛋白的相互作用,本實(shí)驗(yàn)采用酵母雙雜交系統(tǒng),從CSFV易感的的豬血管內(nèi)皮細(xì)胞（SUVEC）中篩選了與NS3蛋白相互作用的宿主細(xì)胞蛋白。獲得了以下研究結(jié)果：（1）利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得豬瘟病毒NS3基因片段,將其... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

豬痕病毒NS3的RT-PCR擴(kuò)增Fig.lAmplificationonCSFV-NS3genebyRT-PCR

p GBKT7-NS3的雙酶切鑒定n of bait vector p GBKT7-NS3 by double restriction 子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；l:pGBKT7-NS3酶切產(chǎn)物；2:pGBKIOOOO DNA Marker ； M2： DL10000 DL10000 DBKT7-NS3 with Nde I and Sal I ； 2:pGBKT7 vectGBKT7-NS3的毒性和自激活性檢測(cè)分析報(bào)告基因的毒性和自激活性檢測(cè)fect and Self-activation test of bait vector pGBKT7-N

鋪海綿，五層濾紙，用玻璃棒趕走氣泡棒趕走氣泡，平鋪上PVDF膜，再鋪上上。轉(zhuǎn)膜2-3 h，在其四周放上冰袋。5%的BSA中常溫封閉4 h，蛋白面朝液中夾出剪去邊緣，平鋪到稀釋好的一，放入-2(rC冰箱中保存以后再用，在，加入稀釋好的二抗溶液（8mL),搖，放-20度冰箱以后再用。在保鮮盒內(nèi)放入配制好的DAB顯色液中，lOmin

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬外周血單個(gè)核細(xì)胞cDNA酵母表達(dá)文庫(kù)的構(gòu)建及與豬瘟病毒E2蛋白相互作用細(xì)胞蛋白的篩選[J]. 廖亞金,李素,賀番,何文瑞,董泓,馮爍,孫元,仇華吉.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(09)
[2]酵母雙雜交中誘餌蛋白載體的構(gòu)建與鑒定方法[J]. 李堯鋒,張楠陽,趙永聚.  中國(guó)生物工程雜志. 2012(02)
[3]雞法氏囊B細(xì)胞酵母雙雜交cDNA文庫(kù)的構(gòu)建[J]. 彭建平,劉嘉,諶南輝.  江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2009(01)
[4]菌落PCR方法的建立及其與常規(guī)PCR方法的比較[J]. 徐麗,蔡俊鵬.  華南理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2004(05)



本文編號(hào)：3343329