旨在表達和純化豬δ冠狀病毒（PDCoV）N蛋白并制備該蛋白的多克隆抗體。以RT-PCR擴增PDCoV N基因并與表達載體pET-28a構(gòu)建重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化Transetta（DE3）菌株誘導(dǎo)表達,SDS-PAGE鑒定融合蛋白表達,以純化的N蛋白免疫家兔制備多克隆抗體,Western blot驗證兔抗血清特異性,間接ELISA測定抗血清效價。利用間接免疫熒光試驗（IFA）、免疫熒光試驗（IF）、流式細胞術(shù)（FCM）鑒定其診斷應(yīng)用價值。重組N蛋白為可溶性表達,大小約為44 kD,制備的兔抗N蛋白抗體效價可達1∶204 800。IFA與FCM試驗證實該抗體能與PDCoV特異性結(jié)合,與PEDV及TGEV無交叉反應(yīng),IF試驗表明該抗體可用于檢測小腸組織中的PDCoV。 

【文章來源】：生物技術(shù)通報. 2020,36(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

PDCoV N蛋白結(jié)構(gòu)與功能預(yù)測

PDCoV重組N蛋白（pET28-N)SDS-PAGE(A）及WB鑒定（B）圖

通過IFA測定兔抗N蛋白抗體對PDCoV感染的ST細胞結(jié)合情況，結(jié)果表明，PDCoV感染ST細胞的細胞漿可觀察到特異性的綠色熒光，而在TGEV感染的ST細胞與PEDV感染的Vero細胞上未見熒光，未接毒組也無熒光信號，同時，以TGEV及PEDV特異性抗血清為一抗，可在相應(yīng)的細胞上觀察到特異性的綠色熒光，表明該N蛋白抗體可與PDCoV特異性結(jié)合，與TGEV及PEDV無交叉反應(yīng)（圖5）。2.5.2 流式細胞檢測

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3340322