發(fā)布時(shí)間：2021-08-13 11:12

　　旨在表達(dá)和純化豬δ冠狀病毒（PDCoV）N蛋白并制備該蛋白的多克隆抗體。以RT-PCR擴(kuò)增PDCoV N基因并與表達(dá)載體pET-28a構(gòu)建重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化Transetta（DE3）菌株誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE鑒定融合蛋白表達(dá),以純化的N蛋白免疫家兔制備多克隆抗體,Western blot驗(yàn)證兔抗血清特異性,間接ELISA測(cè)定抗血清效價(jià)。利用間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）、免疫熒光試驗(yàn)（IF）、流式細(xì)胞術(shù)（FCM）鑒定其診斷應(yīng)用價(jià)值。重組N蛋白為可溶性表達(dá),大小約為44 kD,制備的兔抗N蛋白抗體效價(jià)可達(dá)1∶204 800。IFA與FCM試驗(yàn)證實(shí)該抗體能與PDCoV特異性結(jié)合,與PEDV及TGEV無交叉反應(yīng),IF試驗(yàn)表明該抗體可用于檢測(cè)小腸組織中的PDCoV。 

【文章來源】：生物技術(shù)通報(bào). 2020,36(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

PDCoV N蛋白結(jié)構(gòu)與功能預(yù)測(cè)

PDCoV重組N蛋白（pET28-N)SDS-PAGE(A）及WB鑒定（B）圖

通過IFA測(cè)定兔抗N蛋白抗體對(duì)PDCoV感染的ST細(xì)胞結(jié)合情況，結(jié)果表明，PDCoV感染ST細(xì)胞的細(xì)胞漿可觀察到特異性的綠色熒光，而在TGEV感染的ST細(xì)胞與PEDV感染的Vero細(xì)胞上未見熒光，未接毒組也無熒光信號(hào)，同時(shí)，以TGEV及PEDV特異性抗血清為一抗，可在相應(yīng)的細(xì)胞上觀察到特異性的綠色熒光，表明該N蛋白抗體可與PDCoV特異性結(jié)合，與TGEV及PEDV無交叉反應(yīng)（圖5）。2.5.2 流式細(xì)胞檢測(cè)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3340322