為了制備豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）Nsp9蛋白鼠源多克隆抗體并檢驗(yàn)其中和活性,試驗(yàn)采用RT-PCR方法擴(kuò)增了PRRSV的Nsp9基因保守區(qū)域片段,將其克隆至原核表達(dá)載體pET-28a中,并在大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞中表達(dá)重組Nsp9蛋白;純化后的重組Nsp9蛋白與弗氏佐劑充分混合乳化,采用皮下多點(diǎn)注射免疫Balb/c小鼠,經(jīng)3次免疫后獲得多克隆抗體;用間接ELISA法檢測(cè)抗體效價(jià),以血清中和試驗(yàn)和間接免疫熒光試驗(yàn)檢驗(yàn)其中和活性。結(jié)果表明:試驗(yàn)成功擴(kuò)增了大小為951 bp的Nsp9基因片段,經(jīng)雙酶切和序列測(cè)定,重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-Nsp9構(gòu)建成功;重組Nsp9蛋白的分子質(zhì)量約為36.0 ku;制備的多克隆抗體效價(jià)較高,重組Nsp9蛋白多克隆抗體經(jīng)2～8倍倍比稀釋時(shí),與PBS對(duì)照相比熒光數(shù)量遞增。說明在大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞中成功表達(dá)了PRRSV重組Nsp9蛋白,制備的鼠源多克隆抗體有一定的抗PRRSV中和活性。 

【文章來源】：黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020,(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

間接免疫熒光試驗(yàn)結(jié)果(40 μm)

Nsp9基因片段PCR擴(kuò)增結(jié)果

用限制性內(nèi)切酶BamH Ⅰ和Hind Ⅲ雙酶切重組表達(dá)質(zhì)粒,結(jié)果得到大小約為 951 bp的目的基因條帶和 5 400 bp的載體基因條帶(見圖2),表明試驗(yàn)成功構(gòu)建出重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-Nsp9。2.3 重組Nsp9蛋白表達(dá)及純化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬繁殖與呼吸系統(tǒng)綜合征病毒華南株GDgz的分離鑒定及遺傳進(jìn)化分析[J]. 于林洋,董建國,張樂宜,劉燕玲,梁鵬帥,王磊,宋長緒.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(04)
[2]豬繁殖與呼吸綜合征病毒FS株Nsp9基因的克隆與序列分析[J]. 趙孟孟,宋中寶,馮松林,王文佳,邢星,馮嘉萍,張桂紅.  中國畜牧獸醫(yī). 2016(09)



本文編號(hào)：3339656