旨在分析布魯菌（Brucella）轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子HFQ誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的免疫反應(yīng)。以熱滅活牛種布魯菌S2308為模板,根據(jù)GenBank登錄的S2308 hfq基因序列（BAB1₁134）設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增hfq基因片段后,將其克隆至原核表達(dá)載體pET-32a,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞,誘導(dǎo)HFQ蛋白表達(dá);利用SDS-PAGE電泳以及Western blot對(duì)重組HFQ蛋白（rHFQ）進(jìn)行分析;pET-32a空載體、rHFQ和疫苗株M5-90刺激小鼠巨噬細(xì)胞RAW 264.7,利用ELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4的表達(dá)水平;將pET-32a、rHFQ和M5-90免疫小鼠后,檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞中IFN-γ和IL-4的水平,以及小鼠血清中IgG抗體水平。結(jié)果顯示,hfq基因大小為237 bp,編碼79個(gè)氨基酸,rHFQ大約在25.8 ku處出現(xiàn)蛋白條帶,純化后為單一條帶。Western blot結(jié)果顯示,rHFQ具有較好的反應(yīng)原性。rHFQ刺激RAW 264.7后,誘導(dǎo)IFN-γ和IL-4的水平與M5-90組相似,顯著高于PBS組和pET-32... 

【文章來(lái)源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,51(08)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

hfq基因的PCR擴(kuò)增

表達(dá)蛋白經(jīng)AKTAxpress智能多維純化系統(tǒng)純化后進(jìn)行SDS-PAGE檢測(cè),結(jié)果顯示,在相應(yīng)位置出現(xiàn)單一蛋白條帶,rHFQ的純化效果較好(圖3A)。對(duì)純化蛋白進(jìn)行Western blot分析,結(jié)果顯示,在大約25.8 ku處出現(xiàn)特異性反應(yīng)條帶(圖3B),表明rHFQ具有良好的反應(yīng)原性。2.3 小鼠巨噬細(xì)胞RAW 264.7中的細(xì)胞因子檢測(cè)

rHFQ的SDS-PAGE和Western blot分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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